为什么ELISA中常使用四甲基联苯胺作为辣根过氧化酶的底物？

答：辣根过氧化物酶（HRP）常用的底物有邻苯二胺（o-phenylenediamine，OPD）、四甲基联苯胺（tetramethylbenzidine，TMB）和苯酚偶联底物等。其中，TMB氧化后其产物联苯醌在波长450nm处有最大吸收峰。H₂ O₂ 和TMB反应时形成蓝色的阳离子根，当pH降低时，蓝色的阳离子根则转变为黄色的联苯醌。可使用硫酸终止催化反应，产物稳定的时间一般为90分钟。又因TMB相对于OPD没有致突变作用，因此在酶免疫测定中使用广泛。在成品的试剂盒中，TMB底物通常为配好的A液和B液，其中一种为H₂ O₂ 溶液，另一种为TMB溶液。由于TMB在溶液中不稳定，实际工作中如发现A液和B液单独显色或两者混合后显色，说明该试剂已经变质，不应使用，以免导致假阳性结果。