答:核酸(nucleic acids)是生命的最基本的物质之一,存在于所有真核生物、原核生物、病毒或噬菌体内,其承担着生物体遗传信息的携带和传递,是物种进化和繁衍的物质基础。天然存在的
1答:细胞的破碎方法很多,主要分为物理法和化学法两大类。物理法主要有超声波处理法、微波处理法反复冻融法、液氮研磨法等,缺点是存在机械剪切力,损害核酸分子结构的完整性。化学
3答:在核酸的分离与纯化过程中,需要除去的杂质成分主要包括以下三大类:①非核酸的大分子物质,如蛋白质、多糖、脂类等;②非需要的核酸分子,提取DNA时的RNA分子,提取RNA时的DNA分子;③
4答:在核酸提取的操作过程中,为保持核酸结构的完整性,应尽量简化操作步骤,减少各种破坏核酸的有害因素:①控制一定的pH范围(pH 4~10),避免过酸或过碱对核酸链中磷酸二酯键的破坏和影响
5答:临床常见的标本有血液、尿液、唾液、分泌物、组织及细胞等。不同的实验目的,对于核酸的浓度、纯度、完整性等要求各不相同。目前核分离与纯化的方法很多,材料多样且各具特点
6答:基因组DNA的粗提法仅适合于对基因组DNA完整性要求不高的分子生物学实验,如靶基因部分序列的分子检测与鉴定、耐药基因及耐药相关突变的检测等。粗提法提取细菌或真菌的基因
7答:SDS-CTAB法的操作步骤如下:①细菌收集:100ml细菌过夜培养液,5000rpm离心10分钟,去上清液。②菌体裂解:加9.5ml TE悬浮沉淀,并加0.5ml 10% SDS,50μl 20mg/ml(或1mg干粉)蛋白酶K,混
8答:CLSI MM13-A《分子实验标本的收集、运输、核酸制备和贮存;批准指南》提供分子实验标本有关正确安全的标本采集、核酸的分离、核酸纯化的内容,以及涉及每个检测标本/核酸类型
9答:分子生物学诊断(molecular diagnostics)也叫做核酸检测(nucleic acid-based tests,NATs),其在感染性疾病的应用主要包括:①用于感染性疾病的早期诊断,弥补血清学抗体检测存在的&ld
10一、直接检测特定细菌性病原体的技术:①循环扩增技术:普通PCR(conventional polymerase chain reaction)、巢式PCR(nested PCR)、半巢式PCR(seminested PCR)、反转录PCR(reverse tran
11答:按核酸检测的技术原理,直接核酸检测(direct NATs)主要包括两大类,一类靶向扩增的直接核酸扩增检测(target-amplified direct nucleic acid amplification tests,NAATs),其采用人工
12答:①检测时间短:一些需要长时间培养的细菌(如结核杆菌)或病毒,直接核酸检测的方法能在1~6小时内得到检验结果。②检测通量高:一些直接核酸检测可以在同一个时间里进行几百个标本的
13答:由于直接核酸检测具有检测时间短、检测通量高、检测的灵敏度高等特点,在重大疫情爆发或者生物恐怖主义的袭击时,直接核酸检测能快速及时地作出正确的诊断或分析,如应对措施得
14答:①假阴性:某些第一代直接核酸扩增检测(NAATs)会因为扩增抑制作用而导致试剂灵敏度的降低(如采用尿标本检测衣原体),从而引起假阴性结果,但这种抑制作用可通过内在监控或扩增控制
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