第三节 基因克隆的基本过程

获取目的基因的主要方法有如下几种。构建基因组DNA文库的简要过程如下：分离细胞或组织染色体DNA，经限制性内切酶切割或机械剪切成大小不等的片段，其中即含目的基因片段。这种存在于受体菌内由克隆载体所携带的所有基因组DNA片段的集合，就代表了基因组DNA文库。从基因组DNA文库中鉴定带有目的基因的克隆，常用菌落或噬斑原位杂交的方法来完成。针对cDNA表达文库（由cDNA克隆到表达载体构成），还可利用亲和筛选法筛选目的cDNA。利用酵母单杂交系统可克隆DNA结合蛋白的基因，利用酵母双杂交系统可克隆特异性相互作用 ......