四、单糖放射性核素示踪法

最初用于分析蛋白是否糖基化的方法是用放射性核素标记的单糖前体来进行示踪。尽管UDP或GDP-单糖是糖链合成的原料，但是，由于它们不能进入细胞，因此细胞内的糖链合成的示踪只能用于标记的单糖。单糖掺入效率远低于放射性核素标记的氨基酸掺入蛋白。影响放射性单糖掺入的条件包括：标记物的浓度、细胞的密度、标记时间等等，最主要的还是存在着非放射性葡萄糖、半乳糖等的竞争。带有放射性单糖的糖蛋白在标记完成后可以进行免疫沉淀，然后通过免疫印迹鉴定出蛋白区带，结合放射性信号可以确定糖基化蛋白的存在。用串联质谱法或PSD功能的M ......