三、DNA序列测定的主要步骤

用质粒、染色体DNA或者PCR产物等双链DNA作为模板进行序列分析时，需经强碱如高浓度NaOH处理，使双链变性解链，形成单链DNA模板。而用M13噬菌体等单链DNA作为模板进行序列分析时，无需上述变性处理过程。制备好的单链DNA模板与测序引物在适当的反应缓冲体系中混合后，于68℃加热2min，然后缓慢冷却至30℃左右，测序引物互补结合到单链模板的相应位置上，完成退火过程。A、C、G、T4条泳道上的各个泳带，分别代表引物延长并在特定位置被阻断时所生成的聚核苷酸链，从下向上阅读X射线片上的显影区带，即从测序引 ......