[辅助检查]一、手工测序

Sanger法利用DNA聚合酶和双脱氧链终止法测定DNA核苷酸序列。DNA聚合酶利用单链DNA为模板，合成互补链，同时，该酶又利用2 ′，3 ′‐双脱氧核苷三磷酸作底物，使之掺入到寡核苷酸链的3 ′末端，从而终止该链的进一步延长。由于双脱氧核苷三磷酸的种类不同，掺入的位置（即终止部位）也就不同，从而形成长度不同的互补链。因此，利用放射性标记核苷酸后，和聚丙烯酰胺凝胶电泳，即可读出模板DNA的互补链序列。在上述碱变性后的模板DNA溶液中加入测序引物和复性缓冲液各2 μ l，混匀，离心（65℃，5min），立 ......