为什么ELISA测定易受到时间、温度和pH的影响？

答：由于反应条件会影响ELISA方法的灵敏度和准确性，因而建立一个最佳反应体系是测定的一个重要环节。其中，常用的缓冲液有磷酸盐缓冲液、巴比妥缓冲液、醋酸缓冲液、硼酸缓冲液等；抗原抗体复合物在偏酸或偏碱的环境下易于解离，故一般要求缓冲液的pH在7.0～8.5左右。离子强度过高，不利于抗原抗体结合反应，而离子强度过低，则缓冲能力不足，一般以0.01～0.1mol/L为宜。抗原抗体反应达到平衡，要求适宜的温度和温育时间，它又与抗体本身的亲和力直接相关，不同批次的抗体所需的时间和温度会有所差异；有的在室温下15分钟即可达到平衡，有的则在4℃下数天才能达到平衡。因此，在建立ELISA方法时须选择不同的温度和温育时间加以比较，以选取最适宜的检测条件。