[辅助检查]三、PCR反应条件的优化

模板对于PCR反应有如图纸对于建筑业一样重要。PCR可以DNA或RNA为模板进行扩增，RNA需逆转录为cDNA后方可正常扩增。以质粒DNA为模板和以染色体DNA为模板的扩增条件有所不同，前者所需的聚合酶量少，循环数少，反应条件也不如后者严谨。扩增靶序列的长度根据目的不同而有所差异，用于克隆表达自然要扩增全长基因，而如果用于检测目的，扩增片段的长度应在500bp以下，以保证扩增效率。PCR实验中使用dUTP,而不用dTTP，在扩增前使用Uracil N‐glycosylase（尿嘧啶糖基化酶‐UDG酶）处理 ......