二、关键工具酶

DNA体外重组主要涉及2种关键的酶，即限制性核酸内切酶和DNA连接酶。为了有效地应用限制性内切酶，可按照它们所识别和切割的靶序列的特征分类如下：切割位点靠近靶序列5′端:这种靶序列一般为6bp或6bp以上，限制性内切酶切割双链DNA时是在靠近靶序列的5 ′端切断磷酸二酯键，比如Hind Ⅲ的酶切位点是A ^ AGCTT，切割。T4 DNA连接酶是ATP依赖的DNA连接酶，在ATP和Mg2 +存在的情况下能催化两条DNA双链上相邻的5 ′-磷酸基和3 ′-羟基之间形成3 ′-5 ′-磷酸二酯键，最适反应温度 ......