由于胰岛素瘤分泌胰岛素亢进,进而导致低血糖发作,所以其检验指标主要为血清胰岛素、C肽、葡萄糖测定。当测定血糖和胰岛素不能确诊时,可采用饥饿和运动试验以及促分泌物质激发试验,利用试验时胰岛素分泌增加和(或)血糖下降,来确定诊断。虽然这三联征可诊断任何原因引起的空腹低血糖,但至今对胰岛素瘤的诊断仍具有重要意义。空腹血糖低和血清胰岛素增高以及低血糖发作时的血糖和胰岛素水平,是诊断该病最有价值的检验指标。对于部分不能确诊的病例,需进行功能试验来辅助诊断。