耐药菌株
什么是D-试验？
如何检测青霉素的诱导
如何报告葡萄球菌对青
产碳青霉烯酶菌株的检
卡他莫拉菌目前是否有
什么是AmpC酶诱导试验
如何报告D-试验结果？
如何进行苯唑西林盐平
如何阅读三维试验药敏
| 1 | 答：细菌产生beta;-内酰胺酶是其对beta;-内酰胺类抗生素耐药的最主要和常见的耐药机制，该酶能水解青霉素类和头孢菌素类结构中的beta;-内酰胺环使之失去抗菌活性导致细菌耐...... |
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| 2 | 答：β-内酰胺酶的检测方法主要有头孢硝噻吩法和碘测定法，目前临床微生物学实验室常用的方法是头孢硝噻吩法。 |
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| 3 | 答：原理是头孢硝噻吩（Nitrocefin）的beta;-内酰胺环受beta;-内酰胺酶的作用开环后，产生由黄色向红色转变的颜色反应，即为产酶菌株。可用滴管吸取工作液1滴直接置于测试菌的菌落...... |
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| 4 | 答：原理是青霉素结构中的beta;-内酰胺环受细菌beta;-内酰胺酶的作用开环后形成青霉噻唑酸，后者与蓝色淀粉-碘试剂中的碘结合，使指示剂由蓝色转变为白色者即为产酶株。...... |
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| 5 | 答：根据CLSI的推荐意见，beta;-内酰胺酶检测阳性的嗜血杆菌属、淋病奈瑟菌和卡他莫拉菌对青霉素、氨苄西林和阿莫西林耐药。肠球菌属因产生beta;-内酰胺酶而导致对氨苄西林或...... |
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| 6 | 答：ESBLs是超广谱beta;-内酰胺酶（extended spectrum beta;-lactamases）的英文缩写。是一类在广谱酶TEM、SHV的酶基因发生1～5个以上核苷酸的点突变衍化而来的系列酶，具有广泛的...... |
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| 7 | 答：用纸片法进行细菌对头孢噻肟、头孢他啶等几种三代头孢菌素和单环类的氨曲南的药敏试验测定。出现以下一种情况即可怀疑该菌株产生ESBL：头孢泊肟的抑菌圈直径le;17mm、头孢...... |
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| 8 | 答：即酶抑制剂增强试验。①纸片扩散法：采用头孢他啶（CAZ）和头孢他啶/克拉维酸（CD02）、头孢噻肟（CTX）和头孢噻肟/克拉维酸（CD03）两组纸片对产ESBL菌株进行药敏试验，如细菌产生ESBL，则ESBL...... |
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| 9 | 答：制备1000micro;g/ml的克拉维酸工作液于minus;70℃保存。使用时用微量加液器吸取融化后的上述克拉维酸溶液10mu;l加于头孢他啶（30micro;g/片）和头孢噻肟（30micro;l/片）上...... |
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| 10 | 答：运用阿莫西林/克拉维酸复合纸片中扩散到药敏平皿中的克拉维酸，抑制细菌产生的酶活性，使距离该纸片附近的三代头孢菌素纸片得以发挥抗菌活性的方法称按双纸片法。双纸片法的...... |
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| 11 | 答：目前CLSI规定，只在临床分离的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌以及奇异变形杆菌中常规检测ESBL，其他细菌中ESBL的检测目前尚无参考的方法。...... |
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| 12 | 为何CLSI推荐的检测ESBL的确证试验不能用于除大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌以及奇异变形杆菌外肠杆菌科细菌中ESBL的检测？答：ESBL确证试验检测的原理是ESBL的活性能...... |
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| 13 | 答：E-test法检测ESBLs的原理为酶抑制剂增强试验。分别将单药和复方制剂置于同一张E-test条的两端。即E-test纸条的一端是头孢他啶或头孢噻肟（0.25～64micro;g/ml），另一端是头孢他...... |
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| 14 | 答：CLSI明确规定，凡产ESBL菌株，无论体外药敏试验敏感与否，均应报告该菌株对所有青霉素类、头孢菌素类包括第四代头孢菌素头孢吡肟以及氨曲南耐药。但该细菌对头霉素类抗菌药如头...... |
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| 15 | 答：除CLSI体检的方法外，国内外学者尚研究了其他的检测产ESBL菌株的方法，但目前这些方法仅限于实验研究，尚不能应用于临床检测。主要有：①CHROMagar产色琼脂结合64g/ml同时鉴定和...... |
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| 16 | 答：肺炎克雷伯菌ATCC 700603常用于ESBL检测实验研究的阳性对照株，它产生的是SHV-18 型ESBL。 |
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| 17 | 答：甲氧西林耐药葡萄球菌（methicillin-resistant Staphylococcus，MRS）是指耐苯唑西林且多重耐药的葡萄球菌，包括甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌（MRSA）和甲氧西林耐药的凝固酶阴性葡...... |
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| 18 | 答：目前，最常用的检测MRS菌株的方法为纸片扩散法，该法以头孢西丁为指示药，对头孢西丁耐药者即为MRS菌株。此外，尚有肉汤稀释法以及含4% NaCl的琼脂稀释法等。...... |
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| 19 | 答：应注意以下几点：①严格按照CLSI文件上的标准操作程序进行；②使用新鲜培养的纯菌落制备菌液；③以30mu;g头孢西丁纸片代替苯唑西林纸片进行检测；④在低于35℃的空气环境中孵育，...... |
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| 20 | 答：两者判断标准不一致。如表：头孢西丁对葡萄球菌的判断标准 |
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| 21 | 答：应注意以下几点：①严格按照CLSI文件上的标准操作程序进行，菌悬液的制备必须采用直接菌落悬浮法；②使用新鲜培养的纯菌落制备菌液；③以苯唑西林进行检测，而非头孢西丁；④培养基为...... |
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| 22 | MRSA苯唑西林盐平板筛选试验 |
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| 23 | 答：MRS（包括MRSA和MRCNS）无论体外试验的结果敏感与否，均应报告对所有的碳青霉烯类、头孢菌素类及酶抑制剂复方制剂如氨苄西林/舒巴坦、阿莫西林/克拉维酸、哌拉西林/他唑巴坦等...... |
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| 24 | 在报告beta;-内酰胺类药物药敏试验结果时，MRS菌株和产ESBLs菌株的报告有何不同？答：对于MRS菌株，需要报告对所有的beta;-内酰胺类药物包括酶抑制剂复方制剂耐药；而对于产ESBLs菌...... |
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| 25 | 答：因为头孢西丁能使MRS菌株的异质性耐药表达更充分，有利于MRS菌株的检出。 |
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| 26 | 答：提高MRS菌株检出率的重点是提高细菌中耐药菌的生长速度及生长比例。通过降低孵育温度如le;35℃、提高接种菌量和提高培养基的渗透压（含2% NaCl培养基）等方法可提高MRS菌株...... |
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| 27 | 答：金黄色葡萄球菌对苯唑西林出现中度敏感（苯唑西林抑菌圈直径为11～12mm或MIC值为2～4g/ml），其耐药机制主要有两种：一是由于细菌产生beta;-内酰胺酶所致，这些菌株产生大量的beta;-...... |
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| 28 | 在葡萄球菌中，如何辨别是mecA介导的耐药性（天然耐药）还是质粒介导的高产beta;-内酰胺酶所导致的耐药性？答：用苯唑西林和阿莫西林/克拉维酸药敏试验可以区分。质粒介导的高产bet...... |
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| 29 | 答：D-试验是一种简便的确定诱导型克林霉素耐药性的纸片试验方法。将含有15mg红霉素的纸片放在离含有2mg克林霉素的纸片15～26mm（纸片边缘到边缘的距离）的地方。经孵育后，观察细菌...... |
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| 30 | 答：红霉素和克林霉素可用于治疗葡萄球菌引起的感染，葡萄球菌中的erm基因编码一种改变了的核糖体结构（23S rRNA的甲基化），可导致对大环内酯类（如红霉素）和林可霉素类（如克林霉素）耐药...... |
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| 31 | 答：临床微生物学实验室对试验结果的报告和质控：如果葡萄球菌对红霉素表现为耐药，但对克林霉素敏感，这种情况下就要进行D-试验，如果不进行D-试验即报告克林霉素敏感或根据红霉素耐...... |
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| 32 | 答：当用红霉素和克林霉素纸片进行邻近试验（D-试验）时，可用金黄色葡萄球菌ATCC BAA2977 （ermA基因介导的可诱导性耐药）和金黄色葡萄球菌ATCC BAA2976（msrA基因介导的只对大环内酯类...... |
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| 33 | 答：青霉素可用于检测葡萄球菌对所有beta;-内酰胺酶不稳定青霉素类抗菌药的敏感性，如氨苄西林、阿莫西林、羧苄西林、美洛西林、哌拉西林和替卡西林。当青霉素对葡萄球菌的MIC...... |
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| 34 | 答：检测方法为青霉素抑菌圈边缘试验，操作步骤同标准的纸片扩散法。在平板上涂布葡萄球菌，之后贴上青霉素纸片，35℃plusmn; 2℃空气培养16～18小时后阅读结果。若青霉素抑菌圈边缘...... |
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| 35 | 答：葡萄球菌对青霉素的药敏试验结果报告如图下图所示：葡萄球菌青霉素敏感性报告流程 |
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| 36 | 答：HLARE即高水平氨基苷类药物耐药的肠球菌（high-level aminoglycoside-resistant enterococci，HLARE）。1979年欧洲首次报道庆大霉素高水平耐药的肠球菌。 |
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| 37 | （2） 肠球菌的主要耐药机制有哪些？答：肠球菌的主要耐药机制包括：①耐青霉素和氨苄西林肠球菌，由低亲和力PBPs和产beta;-内酰胺酶（少数）引起；②氨基苷类高水平耐药（HLAR）肠球菌，由［APH（2pr...... |
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| 38 | 答：肠球菌如果在含高浓度氨基苷类抗生素的条件下生长，表明所检测的氨基苷类抗生素与作用于细胞壁的抗生素（如氨苄西林、青霉素或万古霉素）之间不存在协同作用；相反，如果在含高浓度...... |
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| 39 | 答：方法如下：①挑取血琼脂平板培养过夜的新鲜培养物于生理盐水中，制备浊度相当于0.5麦氏标准的菌悬液；②无菌棉签蘸取菌液均匀涂布于M-H琼脂表面；③将120micro;g/片的庆大霉素纸...... |
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| 40 | 答：主要机制是产生可灭活β-内酰胺类药物的质粒介导的TEM-1型或ROB-1型β-内酰胺酶，以TEM型β-内酰胺酶为多见。 |
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| 41 | 答：BLNAR即β-lactamase negative ampicillin resistant的英文缩写，意思为β-内酰胺阴性氨苄西林耐药的流感嗜血杆菌。 |
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| 42 | 答：BLNAR菌株的耐药机制主要是由于染色体介导的青霉素结合蛋白（penicillin-binding protein，PBP）的改变引起的，如PBP3a或PBP3b，这些PBP 由ftsI基因编码。 |
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| 43 | 答：流感嗜血杆菌对氯霉素的耐药机制主要是产生质粒介导的转乙酰酶，少部分菌株的耐药机制由染色体介导。几乎所有耐氯霉素的菌株都对四环素耐药。...... |
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| 44 | 答：在进行beta;-内酰胺酶试验时，需同时检测1个以上的菌落（建议10个菌落），这是因为同一个患者标本中可同时分离到beta;-内酰胺酶阳性和beta;-内酰胺酶阴性的菌株。一旦beta;-...... |
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| 45 | 答：在测定质粒介导和染色体介导的流感嗜血杆菌对氨苄西林的敏感性时，2micro;g的氨苄西林纸片要比10micro;g的好。因为染色体介导的非beta;-内酰胺酶菌株与质粒介导的产bet...... |
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| 46 | 答：在HTM平皿上检测流感嗜血杆菌对某些抗菌药如头孢克洛、头孢呋辛等的敏感性时会出现双抑菌圈现象，尤其是当用流感嗜血杆菌ATCC 49247进行质量控制时容易出现这种现象。但此...... |
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| 47 | 答：某些流感嗜血杆菌能产生ESBL，目前，对于流感嗜血杆菌中ESBL的检测，除分子生物学方法外，尚无标准的表型检测方法。Stephen G. Tritram等设计了一种纸片预扩散法以检测流感嗜血杆...... |
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| 48 | 答：自1977年于法国首次报道产beta;-内酰胺酶的卡他莫拉菌以来，在随后的近20年中，产beta;-内酰胺酶卡他莫拉菌的检出率呈大幅度上升趋势。Nissinen等报道卡他莫拉菌产酶率1983...... |
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| 49 | 答：卡他莫拉菌产生的beta;-内酰胺酶主要为BRO-1型和BRO-2型，亦有报道产生第三种类型BRO-3。在这几种酶中，质粒介导的BRO-1型占90%以上。BRO-1和BRO-2型beta;-内酰胺酶均能不...... |
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| 50 | 答：目前，CLSIM45-A2文件中对卡他莫拉菌的药敏试验的抗菌药品种已发展到8大类16种，其中有6个抗菌药既具有纸片法药敏试验结果的判断标准，又具有稀释法药敏试验结果的判断标准，包括...... |
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| 51 | 答：一般不推荐常规药敏，但对于医院的流行病学调查、细菌耐药性监测、长期住院或严重感染患者的医院管理需要时，需进行药敏试验。由于卡他莫拉菌产生的beta;-内酰胺酶，一种窄谱...... |
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| 52 | 答：AmpC beta;-内酰胺酶属Bush分类Ⅰ类酶，或Ambler分类的Class C组酶。主要是由革兰阴性杆菌产生的染色体介导的含丝氨酸头孢菌素酶。它可导致细菌对第三代头孢菌素、单环be...... |
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| 53 | 答：质粒AmpC酶主要出现在克雷伯菌、奇异变形杆菌、沙门菌等一些天然缺乏染色体AmpC酶的细菌中，也出现在大肠埃希菌及志贺菌等一些染色体AmpC酶缺陷细菌中。从1989年Bauerfeind...... |
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| 54 | 答：三维试验是一种检测beta;-内酰胺酶的方法，在传统的纸片扩散法基础上发展而来。首先将细菌接种在琼脂平板表面，贴上药物纸片。纸片上的药物向周围的培养基中扩散，构成一维。...... |
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| 55 | 答：三维试验的原理是：AmpC酶可使头霉素类抗菌药水解失活，致使细菌对其耐药。筛选试验：按纸片法药敏试验制备25ml M-H琼脂培养基平板。将0.5麦氏浊度的大肠埃希菌ATCC 25922菌液...... |
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| 56 | 答：挑取单个纯分菌落接种于2ml M-H肉汤中增菌18～24小时，然后吸取200mu;l（按下一步增菌液量的0.4%计算）菌液到含有50ml胰大豆蛋白胨水的增菌液中振荡增菌4小时，离心收集细菌，然后用...... |
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| 57 | 答：可以。由于ESBLs能被酶抑制剂克拉维酸抑制，不被邻氯西林抑制；而AmpC酶则不能被克拉维酸抑制，但可被邻氯西林抑制。因此，可利用克拉维酸和邻氯西林来同时检测肠杆菌科细菌中的E...... |
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| 58 | 答：根据AmpC酶可被氯唑西林抑制而不被克拉维酸抑制，而ESBLs则可被克拉维酸所抑制而不被氯唑西林抑制的原理。可对三维试验结果作如下判断：、阳性而、阴性为单产AmpC酶（B），、阳性而...... |
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| 59 | 答：其他检测AmpC酶的方法主要有：AmpC disk法检测质粒介导的AmpC酶：该方法的操作和原理与三维试验法检测AmpC酶类似。先将大肠埃希菌ATCC 25922按K-B法标准操作均匀涂布于M-H琼...... |
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| 60 | 答：由于染色体介导的AmpC酶基因几乎存在于所有肠杆菌科细菌中，因此用诱导试验检测染色体AmpC酶的产生并不能说明问题。上述三维试验测试结果显示为AmpC酶产生株者提示该菌株不...... |
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| 61 | 答：本试验主要检测细菌是否产生诱导型的AmpC酶，其原理是利用AmpC酶诱导剂诱导细菌产生AmpC酶。操作步骤如下：将待测菌稀释成0.5麦氏浊度菌悬液，均匀涂布M-H平板，待平皿稍干后，中央...... |
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| 62 | 答：目前已报道的可检测碳青霉烯酶的方法主要有EDTA协同试验、改良Hodge试验、三维试验（以亚胺培南替代头孢西丁，其余操作相同）以及E-test法。 |
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| 63 | 答：依据碳青霉烯酶可被EDTA抑制的原理设计。其操作步骤如下：准备M-H药敏琼脂平皿和待测菌，将10mu;g/片亚胺培南贴在上述平板上，然后将一张吸附有10mu;l 0.5mol/L EDTA的纸片（湿...... |
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| 64 | 答：该法最初是由Wavell Hodge建立的一种用于检测产青霉素酶淋病奈瑟菌的试验。之后多位学者用此方法或进行改良用于碳青霉烯酶的检测。其原理是碳青霉烯酶可水解碳青霉烯类抗...... |
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| 65 | 答：E-test试验检测碳青霉烯酶由IMP-EDTA协同试验发展而来。将亚胺培南和亚胺培南+ EDTA分别制备在一张E-test条的两端。凡亚胺培南+ EDTA对测试菌的MIC比单药亚胺培南的MIC降...... |
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| 66 | 答：由于碳青霉烯酶具有很广泛的水解底物谱，临床一旦遇到产该酶的菌株，很难治疗，目前尚无有效药物。最好进行联合药敏试验，或进行联合抗生素治疗。改良Hodge试验检测碳青霉烯酶...... |
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