免疫PCR分析应用与评价

免疫PCR适用于样品量少和组分极低的成分检测

免疫PCR作为一种抗原检测系统,同时具有抗原抗体反应的高度特异性和PCR扩增产物的超敏感性,特别适用于各种样品量极少和组分含量极低的成分检测,并且可直接检测细胞膜上的抗原,已经应用于免疫学研究和临床诊断。免疫PCR技术已被用于测量DNA片段、各种微量激素(如TSH、HCG)、β-Gal、人原癌基因ETS1、血清和脑脊液中的肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-3、IL-5、肿瘤相关抗原(GM3)、血浆中的α-人心钠素(α-hANP)、可溶性T细胞受体(sTCR)、胃癌相关抗原、血清可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、牛单纯疱疹病毒1、人血清中的IL-18和各种分泌物中细菌产生的各种毒素等。实时免疫PCR被认为是蛋白质超微量测量的常规方法。

免疫PCR提高待测组分检测灵敏度

如Hendrickson等用夹心法免疫PCR检测hTSH的灵敏度为1fg(10-19 mol/L),而夹心法ELISA的最低检测限为1pg (10-16 mol/L),前者的检测灵敏度比后者高3个数量级;Lind等报道用实时定量免疫PCR检测前列腺特异性抗原(PSA)较ELISA更敏感;Saito等也证实,用免疫PCR检测健康人血清中的肿瘤坏死因子α(TNF-α)比ELISA的检测灵敏度高5×104倍;用夹心法免疫PCR技术检测重组HBsAg的检测限达15fg,比ELISA高1000倍;用免疫PCR检测人血清中的IL-18,其灵敏度是传统ELISA技术的1.6×104倍,ELISA的最低检测限为40ng/L,而免疫PCR为2.5pg/L。总之,免疫PCR的检测灵敏度比目前其他免疫分析法都要高103~105倍。研究证实,免疫PCR的检测灵敏度与引物序列DNA链的数目(单链或双链)及DNA长度、抗体浓度、PCR放大周期和PCR产物的测定方法密切相关,采用荧光化合物和酶等标记的引物进行PCR扩增,可进一步提高检测灵敏度。但免疫PCR存在的缺点是操作繁杂费时,为防止假阳性结果,实验洗涤必须充分完全,PCR扩增产物电泳时所用的染色剂EB有致癌作用和污染环境,电泳区带的定量分析影响因素多,精密度较差,而实时免疫PCR克服了上述缺点。

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