放射免疫分析技术在激素测定中的应用

放射性核素标记免疫技术的特点是:①不直接测量待测物,而是探测待测物上的标记信号,利用标记物的放大效应,改善了待测物的可测下限;②废除了无机或有机试剂,代之以抗体作为结合试剂,大大提高了方法的特异性,从而使免疫分析从定性变为定量,从常量分析提高到微量和超微量分析。

放射免疫分析在应用上的优点是准确灵敏[可达纳克至飞克(ng~fg)级水平]、特异性强(可识辨结构类似的抗原)、重复性好[变异系数(CV)小于10%]、样品和试剂用量少、仪器试剂价格低廉和技术成熟,现可用此项技术测定的激素已达数十种之多,除作为下丘脑-垂体-甲状腺轴和肾上腺皮质激素、性激素、胺前体摄取与脱羧(amine precursor uptake and decarboxylation,APUD)激素、PTH、降钙素、GH等的常规测定技术外,近年又开展了Lispro胰岛素、肾素、瘦素、骨钙素、LH-β核心片段和LH-α片段及LH二聚体、重组的人GH、血和尿中的TRH类似物TA-910、CRH结合蛋白(CRH-BP)、PTH相关蛋白(PTHrP)、心钠素N-末端片段、SHBG、IGF-1、红细胞生成素(CGRP)、肾上腺髓质素、IGF-BP3、PRL和血小板表面相关免疫球蛋白等多种物质的测定。

与RIA比较,IRMA的主要优点是抗体获得容易,标记简单方便,抗原抗体反应属非竞争性反应,前者反应速度快(2~3 小时);灵敏度比RIA高10~100倍,测定线性范围广;由于固相抗体和标记抗体是分别针对一个抗原分子的两个决定簇的McAb,不易发生非特异性交叉反应,测定特异性高。IRMA的缺点是:如果用典型的双抗体夹心法,则待测抗原的分子必须具有两个以上抗原决定簇,对短肽和半抗原活性物质的测定受到限制。

放射性核素标记免疫分析技术在方法学上存在的弱点使发展受到一定的限制,如必须使用放射性核素作为标记物,存在着辐射防护及放射性污染的问题,保存期受到严格限制;标记试剂的放射性强度随时间而衰变,试剂盒使用时间短,需按计划定期供给,不方便随意使用;批间、批内变异较大,每次操作都要做标准曲线,可测量范围相对较窄,难以实现操作及测量的自动化等。

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