生殖激素的测定,过去主要采用放射免疫分析(radioimmunoassay,RIA)或酶联免疫吸附分析(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)的测定技术。随着免疫学测定技术的发展,近年来,一些先进测定方法相继诞生,包括化学发光免疫分析(chemiluminescence immunoassay,CLLA)和电化学发光免疫分析(electro-chemiluminescence immunoassay,ECLIA)在内的技术已能准确、快速、特异和灵敏地测定血液中各种激素浓度。
放射免疫分析技术(radioimmunoassay,RIA)是20世纪60年代发展起来的一项微量技术,这种方法具有高度的灵敏度和精确性,特异性强,操作方法简单,应用范围广,迄今可用本技术测定的体内微量生物活性物质,如激素、蛋白质、抗体、维生素、药物等,对临床各科的疾病诊断和医学基础研究具有重要意义。
一、原理:放射免疫分析是将具有高灵敏度的放射性核素示踪技术与高度特异性的免疫化学技术结合而建立起来的分析方法,以放射性核素标记的抗原为示踪剂,以非标记抗原(标准抗原或被测抗原)为检测对象,共同与限量的特异性抗体进行竞争性免疫结合反应,由于标记抗原与抗体的结合量(因变量)与非标记抗原的含量(自变量)之间,存在竞争性抑制的反函数关系,可依据反映这一函数关系的标准曲线,求出被测抗原的含量。
二、试剂:RIA的基本试剂有四种,即抗体、放射性核素标记抗原、非标记抗原(已知浓度标准品)和分离剂。目前,生殖激素都有相应的试剂盒。
化学发光分析法(chemiluminescence immunoassay,CIA)是近30年来发展起来的一种高灵敏的微量及痕量分析法,具有仪器设备简单,操作方便,灵敏度高(10-19mol/L),线性响应范围宽和易于实现自动化等显著优点。近年来,在改进和完善原有发光试剂和体系的同时,新发光试剂的合成,新体系的开发,及与其他技术的联用,更显示出化学发光分析的优点,也进一步拓宽了化学发光的应用范围,是继放射免疫分析、酶联免疫分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项最新免疫测定技术。目前,临床上多采用化学发光分析方法检测生殖激素。
一、化学发光原理
化学发光免疫分析(chemiluminescence immunoassay,CLIA)是将化学发光或生物发光体系与免疫反应相结合,用于检测微量抗原或抗体的一种新型标记免疫测定技术。
二、化学发光免疫分析种类
1. 直接化学发光
2. 酶促化学发光或持久发光
促化学发光一般是将碱性磷酸酶标记在抗体或抗原上,纳米磁珠分离后的碱酶标记的抗原、抗体复合物在发光底物AMPPD作用下,持续发出可见光,通过光电倍增管读取光信号。
三、化学发光免疫分析的优点
1. 原理(ECLIA法):待测抗原(T)、钌标记的T竞争性地与生物素化的抗T单克隆抗体结合,待测抗原(T)的量与钌标记的T和生物素化的抗T单克隆抗体所形成的免疫复合物的量成正比。加入链霉亲和素包被的微粒,免疫复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。在磁场作用下,微粒通过磁铁吸附到电极上,未结合的物质被清洗液洗去,电极加电压后产生化学发光,通过光电倍增管进行测定。
2. 试剂:①链霉亲和素包被的微粒;②生物素化的抗睾酮单克隆抗体;③钌(Ru)标记的睾酮多肽;④质控(Q.C)血清。
3. 操作:按仪器操作说明进行,只需分离血清上机,包括加样、分离、搅拌、温育、结果在内的各项操作均由仪器自动进行。
4. 正常参考值:男性:2.8~8.0ng/ml。由于产品不同及各地区实验室的差异,实验室可以有自己的参考值。
1. 原理:待测样品、生物素化的抗促黄体生成素(LH)单克隆抗体与钌(Ru)标记的抗促黄体生成素(LH)另一位点单克隆抗体混匀,形成双抗夹心的抗原抗体复合物,加入链霉亲和素包被的微粒与之结合,在磁场作用下,微粒通过磁铁吸附到电极上,未结合的物质被清洗液洗去,电极加电压后产生化学发光,通过光电倍增管进行测定。
2. 试剂:①链霉亲和素包被的微粒;②生物素化的兔抗促黄体生成素(LH)抗体;③Ru(bpy)32+标记的促黄体生成素(LH)-多肽;④质控(Q.C)血清。
3. 操作:按仪器操作说明进行,只需分离血清上机,包括加样、分离、搅拌、温育、结果在内的各项操作均由仪器自动进行。
4. 正常参考值:男性:1.7~8.6mIU/ml,由于产品不同及各地区实验室的差异,实验室可以有自己的参考值。
1. 原理:待测样品、生物素化的抗卵泡刺激素(FSH)单克隆抗体与钌(Ru)标记的抗卵泡刺激素(FSH)另一位点单克隆抗体混匀,形成双抗夹心的抗原抗体复合物,加入链霉亲和素包被的微粒与之结合。在磁场作用下,微粒通过磁铁吸附到电极上,未结合的物质被清洗液洗去,电极加电压后产生化学发光,通过光电倍增管进行测定。
2. 试剂:①链霉亲和素包被的微粒;②生物素化的抗FSH单克隆抗体;③Ru(bpy)32+标记的抗FSH单克隆抗体;④质控(Q.C)血清。
3. 操作:按仪器操作说明进行,只需分离血清上机,包括加样、分离、搅拌、温育、结果在内的各项操作均由仪器自动进行。
4. 正常参考值:男性:1.5~12.5mIU/ml。由于产品不同及各地区实验室的差异,实验室可以有自己的参考值。
无活性PTH片段和肾小球滤过率干扰PTH测定因此,分析结果时必须考虑血PTH测定的敏感性和代表甲状旁腺功能活动的特异性。近年,凝胶色
体内能升高血糖的内分泌激素主要有生长激素(GH)、糖皮质激素、儿茶酚胺和甲状腺激素。调节代谢和胰岛素抵抗的新途径有FGF21、脂联
除胰岛素外,参与糖代谢调节的激素还有很多,其中对糖代谢影响较明显的有: 下丘脑激素,如生长抑素、促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)和食欲
胎盘是重要的内分泌器官,能产生多种激素、细胞因子、免疫因子、活性蛋白质和酶等,这些产物可反映胎盘的功能。多数胎儿异常与胎盘功
抑制素(inhibin)在卵巢主要由粒层细胞合成。抑制素有两种类型(A和B),两者的alpha;亚基相同,而beta;亚基N端的氨基酸序列不同(beta;A和bet
女性血液循环中的雄激素主要有4种,即睾酮(T)、雄烯二酮、DHEA和DHEAS。睾酮的活性最高,约为雄烯二酮的5~10倍,为DHEAS的20倍。双氢睾酮(D
孕酮支持受孕,维持妊娠。孕酮缺乏或作用障碍可引起不孕或不育,但所需要的浓度很低,因而在临床上,孕酮水平降低并非不孕或不育的主要原
青春发育期血E2>33pmol/L(9pg/ml),为性腺功能启动的标志。成年女性月经周期中,E2呈周期性变化,95%来自卵巢,一般以卵泡早期为基础水平,E2<1