如何进行结核菌培养痰标本的前处理?

答:最常见的是采用消化剂和去污剂相混合的方法来处理标本。目前最常用的消化-去污的方法是N-乙酰-L-半胱氨酸-氢氧化钠法(NALC-2% NAOH法)。具体操作如下:

  1. 将10ml待检痰标本放入一无菌的、有刻度的50ml塑料离心管中,做好标记。离心管带螺旋盖,气密性良好。加入等体积的NALC-NAOH溶液,离心管中NAOH的最终浓度为1%。
  2. 将盖子盖严,颠倒混匀,置涡旋器上振荡20秒。
  3. 将溶液在室温下静置15分钟。为防止标本产生泡沫,应避免多次移动标本。对于黏稠度大的痰液可适当增加NALC浓度;如要提高去污染能力,可适当增加NAOH的浓度。但提高NALC和NAOH浓度会影响分枝杆菌的检出率,通常,NAOH浓度控制在2%以下,作用时间控制在15分钟内。
  4. 消化彻底后向离心管中加入PBS(pH 6.8)至50ml刻度。
  5. 3000r/min水平离心15分钟。
  6. 弃上清液(收集到防溅的、有消毒剂的容器中)。用浸有消毒液的纱布消毒离心管口,重新盖好盖子。
  7. 加入1~2ml(pH 6.8)的0.2%无菌牛血清蛋白(BSA)或PBS,混匀。推荐选用BSA,该试剂对沉淀中的结核杆菌有缓冲和解毒作用,并有助于细菌在固体培养基上的黏附。
  8. 一次性无菌塑料吸管吸取处理后的悬浮液接种到固体培养基中。

除上述方法外,还可采用碱处理法。此法即在NALC-2% NAOH法基础上去除NALC,只用2% NAOH。根据需要NAOH的浓度可增加到3%~4%。所不同的是,需要对消化彻底后的离心沉渣采用HCl中和。具体做法:向管内沉淀物中加入几滴酚红指示剂,用0.1mol/L HCl中和沉淀,边滴边振摇,当出现稳定的黄色后即停止。此时再加PBS或BSA,混匀后接种。

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