答:主要有直接菌落法和增菌法。①直接菌落法:直接从孵育24~48小时的强化布氏血琼脂平板上选取分纯的5个或5个以上形态相同的菌落,在布氏或其他肉汤(经预还原或煮沸并冷却后的清亮肉汤)中制成浊度与0.5麦氏比浊管相当的菌悬液。要注意制备菌悬液之前,平板不应在空气中暴露超过30分钟。②增菌法:从强化布氏血琼脂平板上选取已孵育24~48小时或足够时间的大小合适的直径至少1mm的5个或5个以上形态相同的菌落,接种到未加指示剂的硫乙醇酸盐培养基内(如果使用厌氧罐增菌培养,也可使用强化布氏、强化心脑浸液或Schaedler肉汤代替硫乙醇酸盐肉汤)。接种肉汤孵育6~24小时或达到所需浊度。用预还原或煮沸并冷却的布氏肉汤或其他肉汤,调整浊度至0.5麦氏浊度。对于脆弱类杆菌ATCC 25285,其菌液浓度大约为1 × 108~2 × 108CFU/ml。

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