答:每个血红蛋白分子含有4条珠蛋白肽链,每条肽链结合1个亚铁血红素,形成具有四级空间结构四聚体。亚铁血红素无种属特异性,由Fe2+ 和原卟啉组成。Fe2+ 位于原卟啉中心。在HiCN转化液中,红细胞被溶血剂破坏后,血红蛋白(除硫化血红蛋白外)中的亚铁离子(Fe2+ )被高铁氰化钾氧化成高铁离子(Fe3+ ),血红蛋白转化成高铁血红蛋白(Hi)。高铁血红蛋白与氰根离子(CN- )结合,生成稳定的HiCN。HiCN最大吸收波峰为540nm,波谷为504nm。在特定条件下,毫摩尔消光系数为44L/(mmol·cm)。HiCN在540nm处的吸光度与溶液中的浓度呈正比,根据测得吸光度可求得待测标本的血红蛋白浓度。操作步骤如下:

制备标准曲线:将HiCN参考液稀释为4个浓度(200g/L、100g/L、50g/L、25g/L),然后以HiCN试剂调零,在540nm处分别测定吸光值。以血红蛋白浓度(g/L)为横坐标,其对应的吸光度为纵坐标,在坐标纸上绘制曲线。用Y(A540)=a+bX(C)进行直线回归处理。

常规检测血红蛋白:先将20μl血用5.0m l HiCN试剂稀释,混匀,静置5分钟后,在540nm下测定吸光值,从而得出待检标本的血红蛋白浓度。通过公式  计算,公式中A540 为患者待测HiCN在波长为540nm的吸光值,C为血红蛋白浓度g/L,a为截距,b为斜率。

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