放射受体分析(RRA)分析方法和临床应用

放射受体分析(RRA)与放射性核素标记免疫分析在原理和方法上的相似之处是两者均采用放射性核素作示踪剂,在分析过程中需分离反应体系中的受体-配体(或抗原-抗体)结合物与游离标记配体(抗原或抗体),通过测定分离物的放射性强度,与相应的参考曲线比较,推算出待测受体的浓度。RRA测定受体的方法主要包括配体的选择、受体标本的制备、分析条件选择和受体-配体结合物与游离标记配体的分离等重要环节。

确保配体与所测受体具有高特异性和高亲和力

对任何一种受体系统而言,通常都有几种可供选择的配体,选择的主要目的就是要找到对靶受体具有特异和适合的分子结构的配体,确保配体与所测受体具有较高特异性和亲和力。理想的配体是只与其靶受体或受体亚型结合,且配体-受体结合物的解离速度相对缓慢。一般要从配体的形态、电荷和极性等特性加以考虑。常用3H和125I之类的放射性核素标记配体,标记方法类似于放射性核素标记抗原或抗体。对标记配体,要求其比放射活性高,稳定性好,一般要求比活度大于3.7×1011 Bq/mmol(10Ci/mmol),标记时的稳定性、贮存的稳定性和分析温育的稳定性要好。

受体标本的制备原则是在整个制备过程中要保留受体功能的完整性,其测定结果才能真实反映受体的生理学特性。受体标本的纯化过程通常要在低温(4℃)环境和超速离心等条件下进行,标本的制备是RRA的重要环节。目前,放射受体分析的严重缺陷是没有出售的标准品。

分析条件要求严格

如放射配体的浓度、标本的受体浓度、反应时间与温度及pH等均是影响配体与受体结合的重要因素。通常情况下,对单位点饱和试验要求是有饱和量的标记配体;对多位点饱和试验需满足受体的亲和力(KD值)范围广(KD值在0.1~10),即满足受体及其各种亚型与标记配体充分结合的要求;对于动态及竞争试验要满足[LT]适度大于[RT]。对标本受体浓度的选择常需通过实验来确定,特异性结合量与样品(组织)浓度呈线性范围内的较高受体浓度,即近似于KD值的被认为是可选择受体浓度。实验反应的环境温度和pH及反应时间均要根据检测目的不同,通过有关试验选定。

有效分离受体-配体结合物

RRA是测定受体与配体反应达到平衡时受体结合标记配体的量,来求解受体的密度(数量)与平衡解离常数。当受体与标记配体反应达到平衡后要先分离结合物与游离标记配体,再测定结合物的放射性强度。从理论上讲,结合物与游离标记配体从反应体系中一经分离,结合反应的平衡状态即遭破坏,故选择合适的分离方法和严格控制分离条件,使受体-配体结合物在分离过程中的解离降到最低程度,是有效分离的重要因素。常用的分离方法有离心法、抽滤法、吸附法、透析法和电泳法等,分离操作均要在低温(4℃)环境下进行,并在极短的时间(10秒)内完成。

放射受体分析检测激素受体

目前,在临床实验室可利用RRA检测的受体种类繁多,如黑素刺激素受体(MC1R)、盐皮质激素和糖皮质激素受体、调节细胞内钙离子浓度的ryanodine受体、PTH受体、促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)受体、褪黑素-1α受体、肿瘤坏死因子受体、雄激素受体、环孢素A受体、TSH受体抗体(TRAb)、α1肾上腺素受体、β3肾上腺素受体、血管紧张素Ⅲ型受体(AT-1R)、降钙素基因相关肽(CGRP)受体、表皮生长因子受体(EGF-R)和神经鞘氨醇1-磷酸盐(sphingosine 1-phosphate)受体,还有雌激素、生长抑素、胰岛素、多巴胺、γ-氨基丁酸、TSH、T3、LH、促性腺激素、维生素D、乙酰胆碱、心钠素、脂蛋白、IL-1、IL-2、IL-6、PRL、上皮生长因子、补体、细胞黏附、血小板膜上纤维蛋白等的受体都可用RRA来测定。此外,RRA在药物筛选和临床药物作用机制研究、兴奋敏感性探讨、合理用药与疗效指标观测等中均被广泛采用。谷氨酸脱羧酶(GAD)抗体、蛋白酪氨酸磷酸酶(IA-2A)抗体、胰岛素自身抗体(IAA)和羧基肽酶-H(CPH)抗体的放射配体检测法已用于糖尿病的分型诊断。(伍贤平)

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