临床共聚焦显微镜(Confocal Microscope)是一种能观察到角膜各层组织的三维立体图形的活体显微镜。在角膜的病理、生理、创伤愈合及疾病诊断中较以往其他检查有一定的优势,被认为是目前临床对某些角膜疾病诊断和临床研究最具价值的设备之一。当前,眼科用临床共聚焦显微镜主要有两类,一种是以卤灯光为光源,目前市场上NIDEK公司生产的Confoscan(CS)系列即属这一类型;另一种是以激光为光源,目前市场上Heidelberg公司生产的HRTⅢ型即属这一类型。后者由于光源不同,特别在观察角膜缘Langhans细胞及结膜杯状细胞的变化时,明显优于卤灯光源的共聚焦显微镜,其图像最佳分辨率精度高达1μm,放大倍率800倍,能够分析角膜各细胞层形态。CS系列检查便于操作,容易观察,对角膜不直接接触,但角膜稍不透明,图像即不清晰,HRTⅢ型对欠透明角膜及角膜缘可以检查,但操作相对复杂,探头需与角膜直接接触,易引起感染和不适。正常角膜在临床共聚焦显微镜下主要表现为:

一、角膜的表层上皮,在组织学上为复层扁平上皮,在临床共聚焦显微镜下表现为大的胞体,丰富的胞浆,细胞核大而明显可见,细胞边界清楚,但形态不规则。说明这种表层上皮细胞的特性符合角膜上皮的正常生理代谢过程,形态越扁平,面积越大,则是最表层的上皮。翼状细胞是介于表层上皮和基底上皮之间的过渡细胞,图像上偶尔可发现,这可能与细胞数量较少或形态不典型有关。上皮基底细胞因细胞密度大,以及有很明显发亮的细胞边界,所以图像上很容易被识别(下图)。

临床共聚焦显微镜显示角膜表层鳞状上皮细胞,为较规则的五、六边形,结构完整,排列整齐,细胞中央可见一圆形亮核 ×800

A. 临床共聚焦显微镜显示角膜表层鳞状上皮细胞,为较规则的五、六边形,结构完整,排列整齐,细胞中央可见一圆形亮核 ×800

临床共聚焦显微镜显示角膜上皮基底层细胞,细胞多为圆形,呈蜂窝状外观,愈靠基底层愈明显,和上皮表层细胞外形有明显的区别 ×800

B. 临床共聚焦显微镜显示角膜上皮基底层细胞,细胞多为圆形,呈蜂窝状外观,愈靠基底层愈明显,和上皮表层细胞外形有明显的区别 ×800

二、前弹力层是由胶原纤维构成,无细胞结构,所以在共聚焦显微镜下不显示。三叉神经在角膜周围发出60~80根末梢纤维并脱去髓鞘,浅层行走到达前弹力层形成致密神经丛,所以检查时图像中如有多量神经丛出现,则代表前弹力层的部位(下图)。

临床共聚焦显微镜显示角膜上皮下和上皮内神经,清晰,呈树枝状分布,正常神经密度可以通过计算机软件测量,病变时神经密度减少 ×800

临床共聚焦显微镜显示角膜上皮下和上皮内神经,清晰,呈树枝状分布,正常神经密度可以通过计算机软件测量,病变时神经密度减少 ×800

临床共聚焦显微镜检查角膜周边部,偶见Langhans细胞,神经的外形呈树枝状分布,神经分支的密度也是正常的 ×800

临床共聚焦显微镜检查角膜周边部,偶见Langhans细胞,神经的外形呈树枝状分布,神经分支的密度也是正常的 ×800

三、正常角膜基质层由200~250层胶原纤维板构成,呈交错排列,每层纤维板又由许多平行排列、直径相同的胶原纤维组成。基质区的主要细胞成分为角膜基质细胞,浅基质和深基质层内的角膜基质细胞密度有差异,浅基质层内细胞密度明显高于深基质层内细胞。在不同年龄组中,基质细胞形态和密度有明显差异(下图)。

A. 角膜浅基质层细胞,细胞呈哑铃状,角膜浅基质层细胞密度较深基质层高 ×800

A. 角膜浅基质层细胞,细胞呈哑铃状,角膜浅基质层细胞密度较深基质层高 ×800

角膜深基质层细胞,细胞呈短棒状,细胞自身亮度较浅基质层低,密度也较浅基质层低 ×800

B. 角膜深基质层细胞,细胞呈短棒状,细胞自身亮度较浅基质层低,密度也较浅基质层低 ×800

四、后弹力层是由与角膜基质相类似的胶原纤维组成,因无细胞结构密度,故在共聚焦显微镜下未见图像,仅能由内皮细胞和深基质细胞共在的平面来确认。

五、正常人角膜内皮细胞在临床共聚焦显微镜下观察,是由一层扁平的、有规则镶嵌的六边形细胞构成,每个细胞厚约5μm,直径15~30μm,在细胞与细胞之间有紧密的连接。正常人角膜内皮细胞密度、细胞形态与年龄密切相关,内皮细胞的密度随年龄的增长而下降。共聚焦显微镜下的内皮细胞密度与角膜内皮镜检查无明显差别,但共聚焦显微镜检测到的内皮细胞形态清晰并具有立体感(图1-0-6)。

临床共聚焦显微镜显示正常人角膜内皮细胞,呈正六边形,大小均匀,较内皮显微镜图像清晰,富有立体感

临床共聚焦显微镜显示正常人角膜内皮细胞,呈正六边形,大小均匀,较内皮显微镜图像清晰,富有立体感

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