实验室如何检查钩端螺旋体?

答:根据不同病程采集标本的部位也应不同。发病10天内采集血液样本,1周后采集尿液样本(有时可长达至3个月),有脑膜刺激者采集脑脊液样本。①直接镜检:将标本行差速离心集菌(先行500g离心15分钟,上清液转入另一支离心管以1500g再离心30分钟,弃上清取沉淀涂片)后作暗视野检查,或用Fontana镀银法染色后镜检。也可用免疫荧光法或免疫酶染色法检查。②分离与鉴定:将标本接种至Korthof培养基,置28℃孵育。多数阳性标本在2周内可见培养液呈轻度混浊,然后以暗视野显微镜检查有无钩端螺旋体存在,每周一次,连续5周。若有钩端螺旋体存在,则用已知诊断血清诊断鉴定其血清群和血清型。分离培养标本应连续观察至4个月,仍无生长者始判定为阴性。③动物接种:是分离钩端螺旋体的敏感方法,尤其适用于有杂菌污染的标本。方法是将标本接种于幼龄豚鼠或金地鼠腹腔。接种3~5天后,可用暗视野显微镜检查腹腔液;亦可在接种后3~6天取心血检查并作分离培养。动物死后解剖,可见皮下、肺部等有大小不等的出血斑,肝、脾脏器中有大量钩端螺旋体存在。④分子生物学方法:采用放射性核素或生物素、地高辛标记的特异DNA探针法,其检出标本中钩端螺旋体的特异性、敏感性均优于培养法,且得出结果快速。若先用PCR技术将特异DNA片段先行扩增,再用探针确定,则灵敏度更可提高。例如单用DNA探针技术,可测出200条左右的钩端螺旋体,加用PCR扩增后,则少至10条病原体就可检出。

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