流式细胞仪的基本结构

流式细胞仪的基本结构如下图所示,由4大部分组成,即激光源和光学系统、流动室和液流系统、光电检测及计算机处理系统、细胞分选和自动克隆系统。

激光源和光学系统

经特异性荧光染色的细胞需要合适的光源照射激发才能发出荧光供收集检测。常用的光源有弧光灯和激光;激光器又以氩离子激光器为普遍,也有配合氪离子激光器或染料激光器。光源的选择主要根据被激发物质的激发光谱而定。为使细胞得到均匀照射,并提高分辨率,照射到细胞上的激光光斑直径应和细胞直径相近,因此需将激光光束经透镜会聚。色散棱镜用来选择激光的波长,调整反射镜的角度使调谐到所需要的波长λ,为了进一步使检测的发射荧光更强,并提高荧光讯号的信噪比,在光路中还使用了多种滤片。

流动室和液流系统

流动室和液流系统由压力氮气瓶、鞘液瓶、滤器、样品室、硅化管、流室、喷嘴、吸废瓶、真空泵及多个可调气体控制阀等构成。在氮气压力下,细胞悬液经喷嘴时形成鞘液包裹细胞的层流。调节压力可控制检测细胞的速度,细胞层流垂直而下,与激光束交汇,产生散射光和荧光。

 流式细胞仪基本结构

流式细胞仪基本结构

光电检测及计算机处理系统

光电检测及计算机处理系统由中子吸收板(吸收激光,允许散射光通过)、滤光系(阻止或允许一定波长的光通过)、光电倍增管、电子计算机、图像显示屏等组成。光电倍增管感受前向散射光(forward angle light scatter,FLS)、90°散射光(ninety degree light scatter,90°LS)、绿荧光(green fluorescent light,GFL)和红荧光(red fluorescent light,RFL)而形成参数,从光电倍增管输出的脉冲积分经计算机处理转换成图像,并计算出绝对值或相对率,也能将大容量信息贮入磁盘。

细胞分选和自动克隆系统

细胞分选和自动克隆系统由高频压电晶体、静电偏转板、收集器、细胞恒温装置、自动克隆装置等构成,可将细胞分选和自动克隆。

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