答:流式细胞仪的检测是基于对光信号的检测来实现的,包括对荧光的检测和对散射光的检测,所以在流式细胞仪中,光学系统是最为重要的一个系统,它由一系列进行光采集和光过滤的镜片组成。仪器中进行光电信号转换的元件为光电倍增管,在各个荧光信号检测通路中都配有特定的带通滤片,它可以使特定波长的光信号通过,称为单色器。而采用不同的制作工艺可使滤光片具有不同的通透特性,主要包括以下3种:

  1. 边缘滤片:有长通(long pass, LP)和短通(short pass,SP)滤片两种,LP滤片可阻挡短波而使长波通过,SP滤片则与之相反;
  2. 带通滤片:它可以阻挡高于或低于特定波长范围的光通过;
  3. 跳光滤片:它可以去除连续光谱中某一段特定光谱。

此外流式细胞仪中还有一种重要的光学器件是双色器,又称为双色性反射镜或分光镜,同干涉滤片相比没有吸收层,具有反射特定长波或短波的特性。使用双色器可同时对细胞信号进行多色分析,将采集后的光信号一分为二,根据待测光谱的范围不同将其中一部分反射到不同的检测通路中,而使另一部分通过,被下一个双色器所反射分配。

滤光器和双色器的选择与使用对流式细胞仪的检测结果至关重要。在进行光路设计时,必须将两者结合起来,并要考虑到能量的衰减,合理分配光信号的强度才能保证最佳的信噪比,从而提高结果的准确性。

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