流式细胞术的工作原理

首先,待测细胞被制成单个细胞的悬液,以保证细胞逐个通过受检。

然后,荧光染料使细胞着染,核酸染料(吖啶橙、溴化乙啶、碘化丙啶、光辉霉素、Hoechst 33258等)可直接与DNA或/和RNA结合,结合量与DNA、RNA含量成正比;标有异硫氰酸荧光黄或藻红素的单克隆抗体(如OK7)与相应的细胞亚群结合,使该亚群细胞着染;标有荧光素的配体可与细胞受体产生等当量结合反应。

单细胞悬液在高压氮气的驱使下进入流动室,流动室内充满鞘液,在鞘液的约束下,细胞排成单列由流动室的喷嘴喷出,成为细胞液柱,液柱与入射的激光束垂直相交,产生两种效应:①散射效应,包括前向角散射(反映细胞的直径)和90°散射(反映细胞表面状况和胞内颗粒的质和量);②荧光辐射效应:不同类型的细胞由于结合荧光染料的质和量不同,发出波长不同。散射光和荧光的不同是鉴别不同类型细胞的根据。

根据FLS、90°LS两个参数,可将细胞初步分群,若再作荧光染色处理,则可在物理参量相似的细胞群中,再进一步区别细胞亚群(亚型)。例如在增生活跃的肿瘤细胞群体中,处于不同增殖期的瘤细胞的核酸含量不同,对核酸染料的着染也就不同,由此显示的DNA含量的多少,可计算出处于G0和G1期(二倍体)、S期(超二倍体)、G2和M期(四倍体)或其他高倍体的肿瘤细胞比例(下图),从而了解该细胞群体DNA倍体和细胞动力学状况。

细胞周期分布图

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