淋病患者淋球菌显微镜检查

淋病感染者的泌尿生殖道常见有黄色脓性分泌物,在脓细胞内可找到淋球菌。淋球菌革兰染色呈阴性,具有特殊的菌体形态。因此,取分泌物作涂片,经过革兰染色后,在显微镜下检查在细胞内外有无典型革兰阴性双球菌,可作为初步诊断的依据。

检测准备

仪器耗材:

  1. 普通显微镜。
  2. 妇科检查床。
  3. 扩阴器。
  4. 一次性无菌采集拭子(分男女专用)。
  5. 洁净载玻片。
  6. 革兰染液。
  7. 香柏油。

标本采集:见上一篇中标本的采集部分。

检测流程

一、涂片:取材后将拭子在载玻片上轻轻滚动涂片,制成薄而1均匀的涂片。

二、固定:待涂片在室温下自然干燥后,将涂片(涂膜面向上)迅速通过火焰2~3次,加热固定。应避免加热过度使细胞形态扭曲。

三、革兰染色:包括以下四个步骤:

  1. 将结晶紫溶液铺满在涂片的涂膜面上,染色30~60 s,流水轻轻冲洗。
  2. 将碘液铺满涂片的涂膜面上,染色60 s,流水轻轻冲洗。
  3. 将载玻片上的水甩净,并衬以白色背景,用95%乙醇脱色,至涂膜无蓝色脱下为止,一般需20~30 s(时间长短取决于涂片的厚薄,应避免过度脱色),流水轻轻冲洗。
  4. 用碱性复红或沙黄染液复染60s,流水冲洗后用吸水纸轻轻吸干。

四、镜检:在晾干后的载玻片上滴加香柏油,先在低倍镜下找到视野后转换成油镜观察结果。检查时注意观察细胞类型(如上皮细胞、中性粒细胞),病原体的染色特性(革兰阳性或阴性)、形状(球状或杆状)及位置(细胞内或细胞外)等。

结果判读

染色后革兰阳性菌呈紫色,革兰阴性菌呈红色。淋球菌为革兰阴性菌,在多形核白细胞的胞浆中常成对排列,两菌接触面扁平或稍凹,呈肾形,菌体约为0.6μm×0.8μm大小,但是可以随菌株和生产环境不同有所差异。在同一个多形核白细胞的胞浆中有一对至数十对,部分慢性感染者、耐药菌株感染者和接受不规则治疗者的分泌物涂片中,淋球菌数量较少,排列不规则,有时呈单个、四联或八叠状,且常位于细胞外(淋球菌涂片革兰染色见下图)。

淋病奈瑟菌,革兰染色,X1500

结果报告

根据镜检的“多形核白细胞内找到革兰阴性双球菌”、“多形核白细胞外找到革兰阴性双球菌”和“未找到革兰阴性双球菌”三种结果作出相应的报告。

注意事项

  1. 麻根据患者的性行为方式、病史、临床表现和检测目的,合理地选择采集标本部位。
  2. 涂片时不要用力涂擦,而应将拭子在玻片上轻轻滚动,防止因细胞破裂或变形,使细菌从细胞内逸出,造成诊断上的混淆。
  3. 涂片厚薄要合适,涂片过厚,加之染色过程中脱色时间不足,革兰阴性菌也会呈现紫色,涂片过薄,涂片中几乎没有细胞,会造成假阴性。因此,脱色时间要根据涂片厚薄而定。在大量染片时,最好用已知的革兰阳性菌(如葡萄球菌)和阴性菌(如大肠杆菌)作对比观察。
  4. 固定涂片时只要将涂片迅速通过火焰2,3次,避免加热过度使细胞变形扭曲。当把加热的涂片放到手背上时应不感到太烫为宜。
  5. 每张涂片至少检查2分钟,才可做出阴性报告。
  6. 如果直接涂片中未找到“革兰阴性双球菌”,但是见到其他的各种形态和染色的杂菌以及多形核白细胞,应根据标本采集的部位、性别、年龄等因素,在排除正常菌群的情况下,作相应的报告。比如男性尿道标本直接涂片,革兰染色后镜检未找到“革兰阴性双球菌”,但见到大量的多形核白细胞或杂菌,都会对临床医生的诊断有帮助。

临床意义

  1. 显微镜检查方法简便、价格低廉,其敏感性和特异性取决于标本的类型。对来自于男性急性淋菌性尿道炎患者的标本,其敏感性及特异性高达95%,可作为临床诊断的依据。
  2. 对来自于宫颈标本、无症状男性尿道拭子时,其敏感性仅为40%~70%。女性宫颈分泌物中杂菌较多,有的在形态上很像淋球菌(如不动杆菌),常可造成涂片的假阳性结果,特异性也不高。
  3. 不推荐应用此方法对女性感染者、亚临床感染和疗效监测者以及取自直肠和咽部等其他部位的标本进行判断,亦不能用于疗效判断
  4. 如果在多形核白细胞外见到形态典型的革兰阴性双球菌,需做培养进行确证。
  5. 从患者采集的标本,涂片革兰染色镜检找到革兰阴性双球菌,不可直接报告“找到淋球菌”或“淋病”。

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