浅表组织标本接收后如何接种培养?

答:①浅表组织培养主要为真菌的培养,如毛发、皮屑、甲屑等,将采集的该类标本直接嵌入SDA斜面的琼脂中,置28℃,70%湿度下持续培养15日。每日观察,发现阳性者挑取绒毛状菌落传代马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基。②真皮组织、皮下组织或窦道、瘘管壁组织需先采用微量组织匀浆机粉碎制备组织匀浆后接种。该类组织根据需要进行:定性培养:根据情况接种血琼脂、SDA、L-J培养基、麦康凯(鉴别NTM时使用);分离需氧放线菌时可采用含放线菌酮的SDA(不含氯霉素)或脑心浸液琼脂(BHA),含制霉菌素、黏菌素以及低浓度万古霉素的TM培养基、活性炭酵母浸膏(BCYE)培养基等。定量培养:当寻找不确定病原体时,需要对组织作定量培养。值得注意的是,组织在粉碎前必须使用无菌盐水反复漂洗至少3次。一般认为:如果组织中某种分离菌数量≥105CFU/g,则此组织上存在细菌感染,否则分离菌无法排除定植或污染。

组织定量培养法:首先称重无菌容器,再把组织标本放入容器内称重;加入少许肉汤、无菌PBS或生理盐水,用微量组织匀浆机粉碎组织制备组织匀浆;按下列步骤稀释组织悬液:①0.9ml营养肉汤+ 0.1ml组织悬液,标记为10-1;②0.9ml营养肉汤+ 0.1ml 10-1组织悬液,标记为10-2;③0.9ml营养肉汤+ 0.1ml 10-2组织悬液,标记为10-3;④取每个稀释度组织悬液0.1ml接种于血琼脂和厌氧菌血琼脂,涂抹均匀;⑤将接种后的培养基分别放入需氧及厌氧环境,35℃培养24小时;⑥按下列公式计算:

细菌数/每克组织= N × D × 10 ÷ W

  1. N——在血琼脂平皿上生长的细菌菌落数;
  2. D——稀释倍数(如10-1、10-2或10-3);
  3. W——组织的重量。

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