胰岛细胞培养包括多个技术步骤

  1. 胰岛的分离:胰岛分离的胰腺标本一般来源于人、猪、鼠。胰腺组织最好即取即分,如暂不能分离,可将组织放4℃保存,一般来说,保存时间不宜超过18小时,时间越长,组织细胞所受的损伤越大。Hyon利用从绿茶提取的绿茶多酚配成胰岛组织保存液,能将胰岛组织在室温保存几个月之久,从而有可能集中解决胰岛移植的数量不足问题。胰岛的分离包括机械分离法、胰酶消化法、导管内胶原酶灌注法、全自动分离胰岛法等多种方法
  2. 胰岛细胞的纯化:胰岛细胞的纯化可采用转皿与碘乙酸抑制、密度梯度离心、染色后镜下挑选法,或使用荧光分类器或流式细胞仪分离
  3. 体外检测胰岛功能:将分离的胰岛细胞移植到STZ诱导的糖尿病裸鼠体内,视其是否能逆转小鼠的糖尿病
  4. 胰岛细胞培养:胰岛细胞分离后,经离心洗涤,常选用RPMI 1640培养液培养,对于人类胰岛细胞也可选用DMEM或F12培养,培养液中含动物血清及抗生素、葡萄糖等。如能用人类胎儿的脐带血清培养,则培养的胰岛细胞生长更快
  5. 胰岛细胞株:由于胰岛细胞的分离技术难度较大,费用昂贵,研究者们转向建立具有β细胞特性的细胞系。早期的细胞系来源于啮齿类动物,通过放射线照射或病毒感染产生胰岛素瘤而获得,如INS-1胰岛素瘤细胞株,其特性接近正常的胰岛β细胞,胞内含有较多的胰岛素分泌颗粒,且在细胞外液加入生理浓度的葡萄糖能引起与正常β细胞相似的胰岛素释放。随着转基因技术的发展,近年来多从转基因动物的β细胞瘤中分离细胞株,但目前尚没有完全建成代替胰岛β细胞功能的细胞株。