萋-尼染色法如何操作?

答:萋尔-尼尔逊染色法(Ziehl-Neelson),简称萋-尼染色法(Z-N)。

染色步骤:涂片自然干燥后,火焰固定涂片,将涂片放置在染色架上,玻片间距保持10mm以上的距离;滴加石炭酸复红染液,盖满玻片,火焰加热至出现蒸汽后,脱离火焰,保持染色至少5分钟,染色期间应始终保持痰膜被染色液覆盖,必要时可续加染色液,加温时勿使染色液沸腾,高原或气温低地区适当延长染色时间;流水自玻片一端轻缓冲洗,冲去染色液,沥去标本上剩余的水;自痰膜上端外缘滴加脱色剂布满痰膜,脱色1分钟;如有必要,需流水洗去脱色液后,再次脱色至痰膜无可视红色为止,但脱色时间累计不能超过10分钟;流水自玻片一端轻缓冲洗,冲去脱色液,沥去玻片上剩余的水;滴加亚甲蓝复染液,染色约30秒,如染不上可再次复染一次;流水自玻片一端轻缓冲洗,冲去复染液,然后沥去标本上剩余的水。待玻片干燥后镜检。一张染色合格的涂片,由于被亚甲蓝染色而呈亮蓝色。

镜检:使用双目光学显微镜(目镜10 ×,油镜100 ×)镜检,在淡蓝色背景下,抗酸杆菌呈红色,其他细菌和细胞呈蓝色。为防止抗酸杆菌的交叉污染,严禁油镜镜头直接接触玻片上的痰膜。

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