答:挑取单个纯分菌落接种于2ml M-H肉汤中增菌18~24小时,然后吸取200μl(按下一步增菌液量的0.4%计算)菌液到含有50ml胰大豆蛋白胨水的增菌液中振荡增菌4小时,离心收集细菌,然后用0.01mol/L的磷酸盐缓冲液(pH 7.0)冲洗离心所获得的沉淀物后制成一定浓度的细菌悬液,再用冻融法(−70℃快速冷冻,室温或37℃水浴快速解冻,反复5次)或超声粉碎法(4℃,超声粉碎)破碎细菌细胞,使其菌体内的酶释放出来,离心收集上清液即为β-内酰胺酶的粗提液。取部分上清液接种于M-H平板常规培养,证实无活菌存在,再用头孢硝噻吩纸片确定有β-内酰胺酶的存在。

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