电化学发光免疫分析法的基本原理及试剂

基本原理

电化学发光免疫分析(Electrochemiluminescence Immunoassay,ECLIA)是在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应。采用三联吡啶钌[Ru(bpy)32+]为标记物,[Ru(bpy)32+]在三丙胺自由基(TPA)的催化及三角形脉冲电压激发下,只需0.01ms就可发出稳定的光。ECLIA克服了CLIA技术中每一次发光分子只能利用一次的缺点,Ru(bpy)32+在发光过程中的再循环利用大大提高了分析的灵敏度。

ECLIA包括免疫反应系统和电化学发光系统。免疫反应系统与CLIA测定中的抗原抗体反应系统相同,电化学发光系统包括了电化学和化学发光两个过程,是指由电化学反应引起的化学发光过程,在电极上施加一定的电压或电流时,电极上发生电化学反应,即Ru(bpy)32+失去一个电子,成为Ru(bpy)33+,三丙胺(TPA)也失去一个电子被氧化随即脱氢成三丙胺自由基。三丙胺自由基传递一个电子给Ru(bpy)33+,使其还原成激发态的Ru(bpy)32+,后者不稳定,释放能量由激发态返回到基态时产生发光现象。这个过程可反复进行,直到电场中的三丙胺耗尽。

试剂

与仪器配套的试剂主要为以下几种试剂。

  1. 标准抗原:要求与CLIA相同。
  2. 生物素化抗第一位点单克隆抗体:将生物素衍生物联结于抗第一位点单克隆抗体上,由于生物素与链霉亲合素的结合反应是特异和牢固的结合,可用于分离技术。
  3. 三联吡啶钌标记的抗第二位点单克隆抗体:三联吡啶钌的结构简单,相对分子质量小,每一抗体分子上可同时标记20个以上,同时在无电场和无递电子体(三丙胺)的情况下非常稳定。
  4. 含有三丙胺的缓冲液:在电场下用于启动ECLIA。
  5. 链霉亲和素包被的磁性微粒:由聚苯乙烯包裹的磁性微粒表面包裹大量链霉亲合素,每一链霉亲合素可以和4个生物素分子结合,通过磁性分析技术实现分离自动化。

系统医学科普站点:天山医学院, 转载请注明出处:https://www.tsu.tw/edu/5242.html

小程序

中华皮肤病30年研究成果

心电图学一学就会

认识人体心脏,从解剖开始!

诱发心血管疾病的综合征

近视屈光激光手术矫正

适用于口腔科

做一个健康强健的男人!

智齿为萌出受阻的牙齿

内分泌与机体代谢医学