化学发光免疫分析法的基本原理及试剂

基本原理

化学发光免疫分析法(Chemiluminescence Immunoassay,CLIA)是将化学发光反应与免疫反应结合的一种定量分析的方法,既有发光检测的高度灵敏性,又有免疫分析法的高度特异性。CLIA包括免疫反应和化学发光两个系统。免疫反应系统是将发光物质(在反应剂激发下生成激发态中间体)直接标记在抗原(化学发光免疫分析)或抗体(免疫化学发光分析)上,或酶作用于发光底物。化学发光系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化,形成一个激发态的中间体,当这种激发态中间体回到稳定的基态时,同时发射出光子,利用发光信号测量仪器测量光量子产额。根据化学发光标记物与发光强度的关系,可利用标准曲线计算出被测物的含量。

试剂

目前CLIA均有商品化的试剂盒,CLIA必须具备以下6种试剂。

  1. 标准抗原:标准抗原应与待测物质的理化性质相适应,与其相对分子质量、化学结构最好保持一致。一般来说,如果是当做标准品用的抗原,应该经过高度提纯,纯度越高越好。至于基因重组的标准抗原,要求相同。
  2. 抗体:要求是效价、亲和力和特异性都高的单克隆抗体。
  3. 分离剂:用(羊)抗鼠IgG抗体包被于磁性颗粒表面,以进行磁性分离。
  4. 碱性磷酸酶标记抗原(ALP-Ag):为常用的标记酶,基本要求是既要保持ALP的催化特征,同时也不能损伤抗原的理化特性。
  5. 发光底物:AMPPD为磷酸酯酶的直接发光底物,可用来检测碱性磷酸酶或抗体、核酸探针及其他配基的结合物。经ALP催化水解生成一种不稳定的阴离子,后者分解时可持续发光,发光强度稳定,与ALP的量成正比。ALP-AMPPD发光体系具有非常高的灵敏度。
  6. 洗涤液:用磷酸盐缓冲液配制。

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