血清催乳素检测:放射免疫法、CLIA、ECLIA法

人垂体催乳素(prolactin,PRL)是由垂体前叶产生的蛋白激素。PRL在雌激素、孕激素等的基础上,对泌乳的开始及维持起着重要作用。妊娠后血清PRL水平逐渐增高,至分娩前达高峰,哺乳期维持较高水平。PRL的测定,对诊断垂体肿瘤和泌乳综合征有特别重要的价值,对男性不育如无精子症、少精子症等的诊断也有重要的意义。PRL水平的变化以增高为多数,只有少数病变如垂体前叶功能减退、单纯性PRL分泌缺乏症等,表现为PRL水平降低。目前血清催乳素检测方法有多种,本节主要介绍RIA法、CLIA法、ECLIA法。

放射免疫测定法

一、原理

采用双抗体放射免疫法

  1. Ag+Ag+Ab1[AgAb1]+[AgAb1
  2. [AgAb1]+[AgAb1]+Ab2→[AgAb1]Ab2↓+[AgAb1]Ab2

二、材料

  1. 125I-PRL标记物,含<10uci的125I标记的PRL及PBS。
  2. PRL抗体(Ab1):兔抗人PRL抗血清及PBS。
  3. PRL标准物:7瓶,浓度分别为0、5、10、20、25、50、100、200ng/ml的人PRL。
  4. 质控血清:2瓶,含正常水平及高浓度PRL的人血清。
  5. 沉淀抗体(Ab2):驴抗兔血清及PBS。

三、方法

试管编号后按下表程序进行操作。

血清催乳素放射免疫测试操作表

血清催乳素放射免疫测试操作表
 

四、结果计算

(1)测出每份标本双管的cpm值,并计算平均数。

(2)按下式算出各标准管,质控和患者标本的B/B0%:

(3)以各标准管B/B0为纵轴,标准物浓度Log值(ng/ml)为横轴,在半对数坐标纸上绘制标准曲线。

(4)在标准曲线上查出质控血清及各标本的PRL浓度。

五、注意事项

  1. PRL的分泌也有波动,而且易受应激状态影响。抚摸乳房或吮乳可造成PRL水平升高。各实验室应根据自己的条件做出正常值范围。对异常PRL测定的结果应综合分析,必要时可重复检测。下列正常值仅供参考:血清PRL正常浓度,男性9.8ng/ml(0~20ng/ml),女性12.3ng/ml(2~25ng/ml)。
  2. 其他注意事项同促性腺激素测定。

CLIA法

一、原理

以北京倍爱康生物技术公司的催乳素(PRL)为例。本品为夹心法、化学发光免疫分析法与磁性微粒分离技术相结合的一种检测方法,并使用了两种高亲和力单克隆抗体。

将一定量的荧光素标单克隆抗体和酶标单克隆抗体加入标本、标准品和质控品中,置37℃孵育。荧光素标单克隆抗体和酶标单克隆抗体分别与PRL分子的不同表位结合,形成“三明治”结构。加入过量的结合着磁性微粒的抗荧光素抗体,它快速地与PRL——抗体复合物发生特异性结合。在外加磁场中直接沉淀,不需离心即可分离。倒去上清液,清洗沉淀的复合物,然后加入酶促化学发光底物。底物在酶的作用下被催化裂解,形成不稳定的激发态中间体,当激发态中间体回到基态时便发出光子,形成发光反应,即可使用发光仪检测反应的发光强度。在检测范围内,发光强度与样本中的PRL浓度成正比,通过内插法就可以从标准曲线上读取待测样本的PRL含量。

二、试剂

  1. PRL试剂:含荧光素标PRL单克隆抗体和碱性磷酸酶标PRL单克隆抗体;
  2. PRL标准品:包括复溶后浓度分别为0、40、200、500、2000和5000μIU/ml,以小牛血清配制而成;
  3. 分离试剂:内容物含包被着抗荧光素抗体的磁性微粒;
  4. 清洗液浓缩液:内含表面活性剂、防腐剂;
  5. 底物溶液:含酶促化学发光底物;
  6. PRL质控品:为冻干品,含一定量的PRL。

三、操作:不同型号的仪器操作程序不同,若使用自动化的仪器,则由仪器自动操作所取代,请严格按照仪器使用说明书执行。

四、质量控制:PRL质控品测定值应在规定范围内。

五、参考范围

  1. 正常男性:58.41~338.72μIU/ml
  2. 正常女性:70.08~487.55μIU/ml
  3. 绝经妇女:66.19~408.02μIU/ml

不同地区、不同个体、不同设备以及不同方法进行检测,所测得的PRL水平也有所不同,建议各实验室建立自己的正常值范围。

六、注意事项

  1. 标本应放-20℃贮存,避免反复冻融,严重溶血、黄疸、高脂血症的标本会影响结果。
  2. 不可使用EDTA或柠檬酸钠抗凝血浆标本。
  3. 试剂应贮存在2~8℃冰箱内,在有效期内使用,不同批号试剂盒不能混用。
  4. 待测标本及试剂上机前均应恢复至室温。
  5. 若标本浓度超过5000μIU/ml,需用稀释液稀释后测定。

ECLIA法

一、原理

采用双抗体夹心法原理。待测样品、生物素化的抗泌乳素(PRL)单克隆抗体与钌(Ru)标记的抗泌乳素(PRL)另一位点单克隆抗体混匀,形成双抗夹心的抗原抗体复合物,加入链霉亲和素包被的微粒与之结合,在磁场作用下,微粒通过磁铁吸附到电极上,未结合的物质被清洗液洗去,电极加电压后产生化学发光,通过光电倍增管进行测定。

二、试剂

购买与仪器配套的试剂盒,主要包括以下几种试剂:

  1. 链霉亲和素包被的微粒,粒子浓度0.72mg/ml,生物素结合能力:470ng生物素/mg粒子,含防腐剂。
  2. 生物素化的抗泌乳素单克隆抗体,10ml/1瓶,pH7.0,含防腐剂。
  3. [Ru(bpy)32+标记的抗泌乳素单克隆抗体。
  4. 质控(Q.C)血清。

三、操作:同睾酮。

四、参考范围

  1. 男性:86.0~390.0mIU/L
  2. 女性:72.0~511.0mIU/L

不同地区、不同个体、不同设备以及不同方法进行检测,所测得的PRL水平也有所不同,建议各实验室建立自己的正常值范围。

五、注意事项

  1. 此方法不受溶血、高脂血症、黄疸及类风湿因子的影响,接受高剂量生物素(>5mg/d)治疗的患者,至少要等最后一次摄入生物素8小时后才能采血。
  2. 须注意泌乳素的测定值取决于采血时间,因为泌乳素的分泌呈昼夜的周期性。泌乳素的释放生理性地受吮吸和应激的促进。另外,许多药物(如二苯安定、吩噻嗪)、TRH和雌激素可引起泌乳素升高。多巴胺、L-多巴和麦角胺衍生物抑制泌乳素的释放。
  3. 泌乳素测定结果应结合患者病史、临床其他检查结果综合起来进行诊断。
  4. 标本应放-20℃贮存,避免反复冻融。
  5. 试剂应贮存在2~8℃冰箱内,在有效期内使用,不同批号试剂盒不能混用。
  6. 待测标本及试剂上机前均应恢复至室温。

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