精液的细菌、真菌、支原体培养

常用细菌培养基

一、血液琼脂(血平板)

①成分:普通营养琼脂95ml,脱纤维羊血(或兔血)5ml。

制法:将已灭菌的普通营养琼脂(pH值为7.6)加热溶化;冷却至50℃左右,以无菌手续加入脱纤维羊血(临用前置37℃水浴箱预温),轻轻摇匀(切勿产生气泡),倾注于灭菌平皿内,每一平皿(直径9cm)20ml或分装试管,等凝固后,抽样置35℃培养,18~24h,观察有无细菌生长;如无菌生长,置4℃备用。

②成分:哥伦比亚血琼脂,脱纤维羊血。

制法:按说明书称取哥伦比亚琼脂,加蒸馏水溶后,高压灭菌。冷却至50℃左右,以无菌手续加入脱纤维羊血(使其含量为5%),倾注平皿。

二、巧克力色血琼脂(分离嗜血杆菌用)

成分:氯化钠2.5g,蛋白胨5.0g,牛肉粉2.5g,酵母浸膏2.5g,蒸馏水500ml(以上成分亦可用营养琼脂或哥伦比亚琼脂),氯化血红素15mg,25mg/ml万古霉素,7.5g/L辅酶A(NAD)。

制法:称取前4种成分后,加蒸馏水溶解,用少量0.25mol/L氢氧化钠溶解氯化血红素后加入培养基,调pH 7.8,高压灭菌,至60℃左右加入30ml脱纤维羊血,置85℃水浴中摇动10~15min,冷却至50℃左右加入上述浓度万古霉素、NAD各1ml。摇匀后倾注平板,抽样做无菌试验后,4℃保存备用。

三、麦康凯琼脂:分离革兰阴性杆菌用。

制法:按说明书称取麦康凯琼脂,加蒸馏水溶后,高压灭菌,倾注平皿。

四、罗氏培养基:分离结核分枝杆菌用。

成分:磷酸二氢钾(无水)0.96g,天门冬酰胺(天门冬素)0.72g;枸橼酸镁0.12g,硫酸镁(MgSO4•H2O)0.048g,纯甘油(中性)2.4ml,蒸馏水120ml,马铃薯粉6.0g,新鲜鸡蛋6~8个,10g/L的孔雀绿溶液8ml。

制法:将前6种成分混合,置沸水中加热溶解;加入马铃薯粉,边加边搅拌,注意勿结成块,并继续在沸水浴中加热30min,同时搅拌;待冷却至65℃时加入全蛋液200ml及10g/L孔雀绿溶液8ml,充分混匀;分装于无菌试管,每管约5~6ml,塞上硅胶塞;斜置血清凝固器内,80℃1h,切断电源放置1d,再加温至80℃1h,如此重复3次。抽样置35℃培养48h,如无菌生长,置2~8℃贮存。

常用真菌培养基

一、沙保弱培养基

成分:蛋白胨10g,葡萄糖40g,琼脂20g,氯霉素0.1g,蒸馏水1000ml。

制法:上述成分混合,加热溶解(一般可不校正pH)分装试管,121.3℃高压灭菌15min,趁热制成斜面。如不加琼脂即为沙保弱液体培养基。

二、念珠菌显色培养基

制法:称取柯玛嘉显色培养基,加蒸馏水后,高压灭菌或煮沸灭菌,冷却至50℃左右倾注平板。在该培养基上白色念珠菌显翠绿色,热带念珠菌显灰蓝色,其他念珠菌显玫瑰红色至无色。

常用溶脲脲原体培养基

一、溶脲脲原体培养液

成分:牛肉浸液70ml(可用进口牛肉粉替代);蛋白胨1.0g;NaCl 10.5g;KH2PO40.15g;4.0g/L酚红0.5ml。

制法:调pH至6.0,加热溶化后滤纸过滤,121.3℃高压灭菌,无菌加入小牛血清20ml;250g/L鲜酵母浸液10ml(可用进口酵母浸膏粉替代);青霉素20万单位;400g/L尿素(G6滤器过滤除菌)1.5ml,分装试管,每管4ml。

二、溶脲脲原体固体培养基

将上述培养液每100ml加入琼脂粉1.0g倾注平板即可。

精液中常见细菌、真菌的鉴定程序

细菌培养 以无菌技术将待测精液接种于血平板、巧克力平板,或加上麦康凯平板。接种后的培养基置35℃温箱,在分离培养某些细菌(如淋病奈瑟菌)时,需将已接种的培养基置5%~10%的环境(无培养箱时,可用烛缸代替)。

  1. 淋病奈瑟菌:将精液接种于巧克力平板,5%~10%的环境中,35℃培养24~48h后,取生长的可疑菌落涂片革兰染色,油镜下观察是否为革兰阴性、肾形成双排列,并补做氧化酶及糖发酵试验,对初步认定的菌落可先用头孢硝噻吩(nitrocefin)纸片检测β-内酰胺酶,并做规定的抗生素敏感试验,并可进一步用荧光抗体试验等鉴定。
  2. 革兰阴性杆菌:取平板上分离的纯菌落,按细菌生化鉴定程序操作,并进行药敏试验。
  3. 葡萄球菌及链球菌:根据涂片、染色检查结果做血浆凝固酶、O/F、杆菌肽、Optochin等试验鉴定。
  4. 厌氧菌培养:按厌氧菌培养的要求收集标本,并立即送厌氧培养。
  5. 结核杆菌培养:标本收集后,自行液化接种于罗氏培养基,置35℃培养约2个月,培养期间每周观察结果。发现可疑菌落,作涂片抗酸染色确认。
  6. 真菌培养:取精液接种于沙保弱培养基或念珠菌显色培养基进行培养鉴定。

精液的溶脲脲原体培养

溶脲脲原体除能引起非淋菌性尿道炎外,还可导致不育、自发性流产和死胎。有作者对330例生育和不育男性精液标本进行溶脲脲原体检测,发现不育男性溶脲脲原体检出率(66.1%)高于生育男性(23.6%)。分离培养方法为用无菌滴管吸取精液0.1ml,接种于培养液内,每份标本接种2支。置35℃含5%CO2培养箱或烛缸内培养。分别于24、48、72h观察结果;如溶脲脲原体生长,则水解尿素,使培养基pH升高,液体变红色。再将此液用0.45μm微孔滤膜过滤,滤液转种1支培养液中,仍出现阳性反应,且液体澄清,可确定为溶脲脲原体。将培养悬液转种于平板培养基上,观察集落形态。取培养悬液沉淀或集落涂片,染色后观察溶脲脲原体形态。

精液溶菌酶含量测定

精液溶菌酶(lysozyme)含量可反映机体防御功能及其所在组织器官炎症程度。精浆中溶菌酶含量可以作为男性生殖道感染的诊断指标。

一、检测方法

将腐生微球菌菌粉用pH 6.6PBS配成1g/L悬液,通过Sharp UT302R机3min,达成完全乳化。1g/L乳化菌液加等量已溶化的20g/L琼脂混匀浇板,凝固后打孔,孔径3.5mm,孔距11.5mm。将待测精浆10μl加至孔内,37℃温盒扩散6h。用游标卡尺测量溶菌环直径(mm),从标准曲线换算得溶菌酶浓度(mg/L)。

二、标准曲线制作

将溶菌酶标准品稀释成不同浓度(5、10、20、40、60、80、100、200mg/L),按上法操作,每个浓度设3~5个复孔,测得溶菌环后,算出均值。在半对数纸上,以溶菌酶浓度为纵坐标(对数),溶菌环平均直径为横坐标,制作标准曲线。

三、正常参考值

正常生育男性的精浆:(38.7±20.1)mg/L,范围:4.6~109.1mg/L。

系统医学科普站点:天山医学院, 转载请注明出处:https://www.tsu.tw/edu/5262.html

小程序

内容拓展

中华皮肤病30年研究成果

心电图学一学就会

认识人体心脏,从解剖开始!

诱发心血管疾病的综合征

近视屈光激光手术矫正

适用于口腔科

做一个健康强健的男人!

智齿为萌出受阻的牙齿

内分泌与机体代谢医学