精液细胞改良巴氏染色法

一、染色原理

同苏木精-伊红染色法。不同的是染液中的俾士麦棕为盐基性染料,伊红、亮绿、橙黄与胞质中不同组分的蛋白质结合,而染成不同颜色,以区分各种细胞结构,精子核染色质形态显示较清楚,顶体帽染成蓝色,头部染成黄色,中间段周围的残留胞质呈绿色。同时该法对区分精液中未成熟的生精细胞效果亦较好。

二、试剂配制

EA50的配制:

  1. 将伊红Y、俾士麦棕、亮绿SF分别配成100g/L的水溶液,备用;
  2. 分别取上液伊红Y 5ml,俾士麦棕1ml,亮绿SF1.25ml,用95%乙醇加至200ml;
  3. 加入0.4g磷钨酸和0.1ml饱和碳酸锂溶液,混匀后放入棕黑瓶中室温保存,用之前过滤。

橙黄G6的配制:取橙黄G6结晶10g溶于100ml蒸馏水中,摇匀贮存于棕黑色瓶中保存一周后取50ml加入95%乙醇至1000ml,混匀,再加入0.15g磷钨酸,混匀后放入棕色瓶中,密封,室温下可保存2个月,用之前过滤。

哈里斯(Harris)苏木精染液的配制:称取硫酸铝铵20g溶于200ml蒸馏水中,苏木精1g溶于10ml 95%乙醇中,将两种溶液混匀加热至95℃,然后缓慢加入氧化汞0.8g,搅拌溶解,冷却后过滤,用之前用等量蒸馏水稀释过滤即可。

斯各特(Scott)氏溶液的配制:取NaHCO33.5g,MgSO4•7H2O 20g,加蒸馏水1000ml即可。此液仅用于自来水硬度较高的情况下,但漂洗200张玻片后即需换液。

酸性乙醇溶液的配制:浓盐酸2ml加入无水乙醇300ml中,再加入蒸馏水100ml即可。

三、染色方法

  1. 将干燥的精液涂片用等量混合的95%乙醇和乙醚固定5~15min;
  2. 80%、70%、50%梯度乙醇各浸1~2min至蒸馏水中;
  3. 苏木精染色3min,酸性乙醇分色,其间每一步骤均需用流水漂洗3min,斯各特氏溶液4min;
  4. 蒸馏水浸洗一次后50%、70%、80%、95%梯度乙醇各浸1min;
  5. 橙黄G6染液染色2min,95%乙醇2次各1~2min;
  6. EA50染液染色5min,95%乙醇3次各1min,再入无水乙醇中浸2min;
  7. 二甲苯透明3次各1min,封片。

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内容拓展

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