精液细胞的瑞-吉混合染色方法

一、染色原理

瑞氏染料是由酸性染料伊红和碱性染料美蓝组成,而吉氏染料是由伊红和天青组成,前者在水中混合后产生中性的伊红化美蓝组成的复合染料,其在甲醇中溶解后解离为带正电荷的美蓝离子和带负电荷的伊红离子。精子各组分的异嗜性导致精子被染成紫蓝、紫红或粉红色,如天青对细胞核着色较好,结构显示更清楚。

二、试剂配制

瑞氏染液配制:取瑞氏染料0.1g在研钵中,少量多次加入甲醇(AR级)充分研磨至完全溶解,最后再用甲醇补充至60ml密封置于棕色瓶中保存,可加中性甘油3ml防止甲醇蒸发。

姬姆萨染液配制:取1g吉氏染料放入盛有66ml甘油的圆锥烧瓶内,56℃水浴90~120min,当染料与甘油充分混合后加入66ml甲醇,充分摇匀后室温下棕色瓶保存一周,过滤后即可使用。

三、染色方法

  1. 取液化精液2000r/min离心10min,沉淀用等渗盐水洗3遍,涂片后自然干燥;
  2. 瑞吉混合液(临用前10∶1混合)染色30~60s;
  3. 加等量的PBS(pH6.9)再染色10min;
  4. 自来水冲洗,自然干燥后封片,镜检。

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