精液细胞苏木精-伊红染色法

一、染色原理

带正电荷的碱性染料苏木精与带负电荷的核酸相结合使精子细胞核染成紫蓝色,酸性染料伊红则将细胞质中带相反电荷的蛋白质染成紫红色。

二、试剂配制

苏木精染液的配制:甲液:苏木精1g溶于10ml无水乙醇中;乙液:硫酸铝钾20g加温溶解于20ml蒸馏水中。将甲乙两液混合加热煮沸,沸后去火,待溶液不翻腾后加入氧化汞0.5g,然后使染液迅速冷却,过滤,用时每100ml染液加冰醋酸4ml。

伊红染液的配制:伊红1g溶于5ml蒸馏水中,滴冰醋酸于溶液中,有沉淀生成,至糊状再加水数毫升,再滴入冰醋酸,直至沉淀不再生成,过滤后将沉淀干燥后溶于95%乙醇200ml中即可。

三、染色方法

  1. 精液液化后涂片,干燥后置95%乙醇和乙醚混合液(1∶1)中固定15min;
  2. 流水洗2min,蒸馏水洗1min;
  3. 苏木精染液染色5min,水洗后1%盐酸乙醇分化;
  4. 流水浸洗15min后,伊红染液染1min;
  5. 95%乙醇和无水乙醇各浸洗2次,每次1min;
  6. 苯酚二甲苯(1∶3)5min,二甲苯2次,每次3min,中性树脂封片。
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