精液是一种混合物,由精子和精浆组成。精子产生于睾丸,精浆产生于附睾、前列腺、精囊腺和尿道球腺等附属腺体。正常精液中精子占5%,精浆占95%。在精浆中约30%来自前列腺,60%来自精囊腺,5%~10%来自附睾和尿道球腺等。通过检测精液中不同的指标,可以评价这些器官的功能,分析它们的状态,也可用于综合评价男性不育的病因和机制。
精液标本的正确采集是保证检测结果准确的关键,采集时应规范禁欲时间、射精过程应彻底、标本收集无遗漏。
显微镜检查包括精子密度、精子活力、精子活动率、精子存活率、精子凝集和非精子细胞成分的测定。
一、精子密度
二、精子活动力
三、精子的活动率:精子活率是指正常存活的精子比率,用活精子占精子总数的百分比表示。于高倍镜下系统观察至少5个视野,计数100个精子。
四、精子存活率:精子存活率是采用染料对精子进行染色,根据精子是否着色判断精子的死活,一般精子死亡后,细胞膜的通透性改变,易于着色。可用直接涂片法、伊红染色法检测。
方法:取液化精液1滴于载玻片上,加染色剂混匀,放置片刻,推片,自然干燥后,于高倍镜下系统观察至少5个视野,计数100个精子。染色如下:
精子形态学检查是观察精子正常形态及由生理病理因素引起的精子形态结构异常所占的比例;是评价精子质量的一个重要方面。
一、操作方法
取液化精液1滴推成薄片,空气自然干燥,放入95%乙醇和乙醚(1∶1)混合液中固定15~30分钟,染色,用流水冲去染料,干燥后于油镜下观察100个精子,计算正常与畸形精子的百分率。WHO在《人类精液及精子-宫颈黏液相互作用实验室检验手册》提供的形态学正常参考值为≥30%。
二、精子的染色方法
精子形态学检查染色方法:吉姆萨染色、革兰染色、H-E染色、改良巴氏染色,WHO推荐的精子染色方法为巴氏染色。巴氏染色后结果:精子头部顶体区呈淡蓝色,顶体后区呈深蓝色,中断呈淡红色,尾部呈蓝色。
三、结果观察
头部畸形包括:大头、小头、锥形头、梨形头、无定型头、空泡样头、双头或以上缺陷的联合体;体部畸形包括:缺尾、弯曲尾(尾与头的长轴线呈90°角)、肿胀、不规则卷曲的中段、异常薄的中段或以上各类的联合体;尾部畸形:短尾、多尾、尾部发叉、短尾、宽度不规则和卷尾、或尾部末端伴有微滴以及任何尾部缺陷的联合体。
计算机辅助精液分析(computer assisted sperm analysis,CASA)是将现代的计算机技术和先进的图像处理技术运用在精子质量的分析上,操作简便,分析直观,数据可靠,可对精液中的精子总数、密度、活动力、活动率等进行定量分析,尤其在分析精子运动速度和轨迹特征方面显示了其独特的优越性。
精液样本经过显微镜放大,精子运动的镜下动态图像便可经CCD摄像头被采集,所采集到的图像经由CCD摄像头的视频输出口输出和录像机的视频输入口输入被送入录像机;之后图像信号通过录像机的视频输出,经由视频分配器分成两路,其中一路信号通过监视器的视频输入被送入监视器中被动态显示,另一路通过图像采集卡的视频输入接口被采集到图像采集卡中。操作人员可通过对计算机及相应软件的操作,对在图像采集卡所采集到的图像进行动态分析处理,分析所得结果即可通过打印机打印输出,也可按照提示进行存储。
所测参数图解
精子质量检测系统的结构图
CASA是近十年来发展起来的新技术,现已逐步应用于男科实验室常规分析。CASA的应用提高了男性不育实验室诊断、精子质量研究分析与评价的准确性与客观性,为人类不育提供了可靠的客观评价指标。CASA具有的客观、高效、高精度的特点,尤其能分析与精子运动功能相关的多种参数。CASA系统与传统精液分析技术与方法相比,CASA能更准确地确定精子的运动特征。通过此种分析方法,可以了解正常和异常精子的许多微特征。
由于CASA系统的设置缺乏统一的国际标准,不同厂商和型号的CASA系统分析结果可比性差,目前,WHO并不推荐在精液常规分析中应用CASA技术,尤其是分析精子密度和活动率。但是,精液的自动化分析是今后发展的趋势,CASA在分析精子运动功能指标方面尤其具有优势。随着CASA本身系统的不断改进,其应用前景还是十分广阔的。
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