睾丸疾病的诊断之:精液精子的特殊检查

精子凝集反应和免疫珠试验诊断免疫性不育

精子抗体(IgA和IgG)包裹于精子表面,对诊断免疫性不育症具有特异性。常用的检测方法有混合抗球蛋白反应(mixed antiglobulin reaction,MAR)试验和免疫珠试验。混合抗球蛋白反应是将新鲜未作处理的精液与包裹人IgG的乳胶颗粒或羊红细胞混合,再加入单克隆的抗人IgG抗血清,活动精子与乳胶颗粒产生凝集即证明存在IgG精子抗体。40%或更多的精子产生凝集反应可诊断为免疫性不育症,10%~40%为可疑,少于10%为正常。免疫珠是以共价键和兔抗人免疫球蛋白结合的聚丙烯酰胺小珠。悬滴经缓冲液反复洗涤去除精浆,制成精子悬液。然后在精子悬滴中加入免疫珠悬液,用相差显微镜放大400倍观察精子与免疫珠的凝集反应。用IgA和IgG免疫珠可分别检出带有相应抗体的精子。判断标准与MAR试验相同。

锌/枸橼酸/酸性磷酸酶是前列腺的功能指标

精浆中的生化成分比较复杂,有些生化成分是附性器官功能的指标。凡遇以下情况应进行生化分析:①精液标本容量少于2ml;②精子向前运动力显著下降;③需要评价附性器官功能时。

前列腺功能异常可影响精子的活力。果糖(fructose)和前列腺素由精囊分泌。精浆的2/3来自精囊,精液容量减少和果糖水平(正常范围6.7~33mmol/L)降低表明精囊分泌减退。如不能测出果糖,加上无精子提示先天性精囊缺如(往往同时伴有输精管缺如)或射精管梗阻。这些患者的前列腺标记物,如锌(正常范围值1.2~3.8mmol/L)或枸橼酸(正常值6.9U/L,King-Armstrong法)测定结果即使正常,亦表明前列腺功能异常,因为此时的精浆是没有精囊液稀释的。前列腺功能异常可影响精子的前进运动和活力。此外,炎症是生化异常的常见原因。逆行射精可致精液量和精子数目减少,但是精液的生化分析正常。卡尼汀、甘油磷酸胆碱和α-葡糖苷酶来源于附睾,特别是α-葡糖苷酶是附睾更为特异和敏感的标志物。这些标志物降低往往与附睾或近端输精管梗阻或炎症有关。

精子-去透明带仓鼠卵母细胞试验和精子-宫颈黏液试验评价精子穿卵功能

精子-去透明带仓鼠卵母细胞试验

用上泳法或非连续Percoll梯度离心法制备精子,将密度调节至3.5× 106/ml,在1滴(50~100μl)精子悬滴中加入30个去透明带仓鼠卵母细胞,37℃温育3小时,在相差显微镜下观察胞质中含有精子的卵母细胞数和每个卵母细胞所含精子的平均数。

生理情况下,精子细胞膜与透明带糖蛋白成分相互作用激发顶体反应,然后精子才能进入卵细胞。本试验是通过延长温育时间而产生自发的顶体反应,与生理情况有所不同。但是这种精子-卵母细胞融合过程与生理情况下人的精子-卵子融合过程完全相同,因此可作为精子穿卵功能评价的参考指标。本试验有假阴性,即精子不能与仓鼠卵母细胞融合,但在体外或体内与人卵母细胞受精却获得成功。

精子-宫颈黏液试验

是评价精子穿透力的较好方法。精子-宫颈黏液穿透试验(sperm-cervical mucus penetration test)是证明精子是否有能力在宫颈黏液迁徙的体外模型,包括穿透密度、迁徙距离、迁徙密度减少程度等多项观察参数,而且可在宫颈黏液中观察精子一定时间的存活状态。该试验是不育症全面检查的重要指标。

  1. 体内试验:在排卵期前禁欲2天,性交后9~24小时内吸取宫颈黏液制成压片,在相差显微镜下观察精子的活力。活力分级与精液常规检查相同。每高倍视野有50个以上活动精子,快速直线前进运动精子20个以上为结果良好;每高倍视野活动精子少于10个,特别是没有快速直线前进运动的精子时为精子穿透力减低或宫颈黏液异常。体内试验不仅可检测宫颈黏液中活精子数量,也可确定性交后一定时间内精子在宫颈的存活和运动情况。体内试验结果良好,可排除不育是宫颈因素所致。
  2. 体外试验:常用试验方法是玻片试验,将1滴宫颈黏液置于载玻片上,覆以盖玻片,用直径100μm的硅化小玻璃珠使盖片和载片之间保持适当厚度,在盖片的两侧各滴1滴精液,使精液借毛细管作用向盖片下移动并呈指状突入宫颈黏液中,精子沿着指状突起通道进入宫颈黏液。镜下观察,如精子穿入黏液并且90%以上的精子呈直线前进运动为精子穿透能力正常;如精子穿入黏液的长度距离精液-黏液界面小于500μm为穿透能力差;如精子穿入黏液后很快失去活力或只有摆动或精子未能通过精液-黏液界面为穿透能力异常。

精子顶体反应了解精子顶体结构与功能完整性

顶体(acrosome)是精子头部的膜相帽状结构。在自然受精或体外受精过程中,精-卵融合前精子必须发生顶体反应,顶体完整性则是正常顶体反应的基础。没有顶体的精子不能与卵子结合,结合到卵子透明带上的精子的顶体是完整的。研究顶体反应最精确的方法是采用透射电镜直接观察顶体膜超微结构的变化,但电镜标本制备方法复杂,费时长,成本较高。顶体特异性染色测定的常用方法有单克隆抗体免疫荧光标记法、三色染色法和植物凝集素荧光标记法等,其中豌豆凝集素荧光标记法(Pisum Sativum Agglutinin-FITC,PSA-FITC)简单可靠,PSA标记在整个精子顶体的基质,在荧光显微镜下容易观察。

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