睾丸和附睾精子的获取及制备

梗阻性无精子症患者可以通过附睾抽吸或睾丸活检的方法获得精子。睾丸活检可以得到各级生精细胞和成熟精子,用于胞浆内单精子注射。从睾丸组织和附睾中获取的精子需要经过特殊的处理。

附睾穿刺取精的适应证

一、梗阻性无精子症:如先天性输精管缺如、输精管结扎术后及生殖道炎症、阻塞性无精子症等。

二、某些睾丸性无精子症:如精索静脉曲张、睾丸炎、隐睾及其他原因导致睾丸生精功能低下或生精细胞剥离而精液常规检查未见精子,单侧睾丸活检仍可见曲细精管内有成熟精子。

三、某些特发性无精子症:应进一步追踪原因来分别对待。

附睾穿刺取精相对而言能获得较多的精子用于治疗目的。附睾穿刺所获得样本中红细胞和非精子细胞的污染通常极少,活动精子的分离和优选相对简单。如果穿刺获得了大量的附睾精子,密度梯度离心法是一种有效的精子制备手段,但如果精子数目较少,则进行简单洗涤。

睾丸活检的适应证

  1. 无精子症患者,需了解是否由睾丸输出管道梗阻、生精功能低下、生精阻滞或支持细胞综合征所致。
  2. 隐睾或一侧睾丸胚胎癌,需了解对侧是否存在原位癌。
  3. 附睾取精失败者,通过睾丸活检取得精子或生精细胞。

睾丸精子可用开放式活检或经皮穿刺活检来获取。睾丸精液标本不可避免带有非生殖细胞和大量红细胞,因此需要额外的措施分离获得洁净的精子。

睾丸精子制备

为了分离附着在精曲精管上的长形精子细胞(睾丸精子),需要采用酶学或机械方法。由于精子数目少,活力差,睾丸精子制备只能用于ICSI。

一、酶学方法

  1. 将睾丸组织与胶原酶孵育(如每ml培养液含0.8mg的1A型溶组织梭菌)37℃,1.5~2h,每30min蜗旋振荡一次。
  2. 以100g离心10min,然后检查精子沉淀团。

二、机械方法

  1. 用玻璃盖片将睾丸组织在培养液里压碎,直到产生离散的组织匀浆。
  2. 也可将细注射针头折弯成与培养皿底部平行的样子,从曲细精管剥离细胞。

三、处理精子悬液用于ICSI

  1. 加入1.5ml培养液洗涤精子标本。
  2. 以300g离心8~10min。
  3. 弃去精子沉淀团上大部分上清液,用0.5ml培养液重新悬浮精子沉淀团。
  4. 评估精子的活力和数目,当标本的精子数目很少时,需用更少的培养液重悬精子。
  5. 在培养皿中做一个5~10μl的培养液滴。
  6. 用CO2预平衡过的矿物油覆盖。
  7. 在培养液中加入5~10μl的精子悬液。
  8. 用ICSI吸管小心吸取培养液和矿物油交界面上的活动精子。
  9. 转移精子到一种黏稠的液滴中,如PVP〔7%~10%(100g/L)〕。

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