显微授精的方法

精液准备

精子除了来自于体外排精外,还可以通过显微外科手术获取附睾中精子和睾丸组织中精子。此外还可用睾丸组织中长形精子细胞进行显微授精。不同来源的精子处理方法也不同。

少弱精子症可用密度梯度离心法处理,严重少弱精子症可用mini密度梯度离心法处理。经皮附睾穿刺时,先于注射器中吸取1ml培养液,吸取附睾液后连同培养液一起注入培养皿,观察有无精子,若精子浓度尚可,则行mini密度梯度离心法,否则直接离心取沉淀即可。取睾丸精子时,则需在培养皿中预先加入培养液,放置睾丸组织后,用注射器将生精小管撕碎,再将混悬液吸入离心管中离心取沉淀备用。

卵子的准备

将经37℃、5%CO2培养箱培养4h的卵冠丘复合物吸入含有透明质酸酶溶液的培养皿中,用吸管连续吹打卵冠丘复合物,以除去卵子外层的颗粒细胞,并严格控制卵子在酶中的时间在30s之内。然后将卵子快速移入培养液中,冲洗数次,再用内径约为130μm的管口光滑的巴氏管反复吹打,以除去卵子周围残存的颗粒细胞。将卵子置于倒置显微镜下进行质量及成熟度的评估,确定第一极体是否存在,将选择好的卵子转移到准备好的培养皿中,供ICSI用。

ICSI操作

在倒置显微镜的恒温载物台上,安装好持卵针和穿刺针,调节显微镜注射装置,使其可灵活地控制吸收精子,在低倍显微镜下依次调节持卵针和穿刺针的角度和位置,两个针头相对并与载物台平行。

从Petri皿中央微滴中选择单个形态正常的精子,将吸有少量PVP的穿刺针在精子的尾部1/3处摩擦精子,使精子制动,或在其尾部中段迅速制动,然后将精子吸回穿刺针,吸时尾部在先。移动Petri皿,以便在液滴中发现卵子,用持卵针轻轻拨动卵子,使其第一极体位于6点或12点处,以免穿刺时损伤纺锤体。持卵针轻微负压吸住卵子,穿刺针在3点的位置上推进,穿过透明带和卵膜,进入卵母细胞质内,缓慢将精子注入卵细胞内,应尽量减少进入卵母细胞中的PVP液。轻轻退出穿刺针,退针时,将持卵针保持原固定位置,然后松开持卵针。大多数情况下,裂孔边缘呈漏斗状,指向卵细胞内,提示卵子的质量较好。然后重复上述选精及注射的过程直至所有处于减数分裂Ⅱ期的卵子均被注射完毕。将所有注射过的卵子用培养液冲洗数次,再移入新的培养皿内继续培养。

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小程序

内容拓展

    显微授精适应证

    严重的少、弱、畸精子症 严重少精子症,一次射精的活精子浓度<1×106/ml;少弱畸精症,精子浓度<20×106/ml,同时a+b级运动精子[显微授精技术]

    显微授精的种类

    透明带钻孔法透明带钻孔法(zona drilling,ZD)和部分透明带切割法(partial zona dissection,PZD)。透明带是卵细胞外一层无细胞结构的糖[显微授精技术]

    显微授精技术的应用发展

    显微注射技术早在20世纪60年代就已开始,主要用于体细胞核移植实验,但同时也开始了动物精子显微注射的研究。进入20世纪70年代后,在畜[显微授精技术]

    人工授精的并发症及其处理

    自然周期人工授精的并发症较少,用药促排卵周期的并发症较多,人工授精的操作可能发生少量阴道出血、腹痛、感染、休克。促排卵药物的[人工授精]

    人工授精的实施

    自然周期人工授精一、卵泡监测:自然周期人工授精通常从月经周期的第10d开始采用B超监测卵泡发育。血E2水平检测也可作为卵泡发育的[人工授精]

    人工授精时间的选择

    人工授精时间的选择,是决定人工授精成功的重要环节。授精时间选择在女方的围排卵期,即排卵前日、排卵日、排卵后日。随着检测技术的[人工授精]

    人工授精前的准备

    人工授精前,男女双方需进行体格检查和实验室检查,以确定人工授精的适应证、是否适合妊娠。女方检查:主要检查项目包括体格检查和妇科[人工授精]

    人工授精适应证和禁忌证

    适应证施行人工授精的基本条件是通过子宫输卵管碘油造影或腹腔镜检查证实至少一侧输卵管通畅。夫精人工授精: 精液异常 轻度或中度[人工授精]

    认识人工授精(定义及种类)

    人工授精是目前人类辅助生殖技术中常用的技术之一。1790年,John Hunter为严重尿道下裂患者的妻子行丈夫精液人工授精获得成功,此为[人工授精]

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