精浆柠檬酸的检测

精浆柠檬酸(citrate)含量较高,且几乎全部产生于前列腺。正常生育男性精浆中柠檬酸含量的正常参考值范围为18.65~55.87mmol/L。精液中的柠檬酸具有如下功能:

  1. 可通过与Ca2+结合而影响精液的液化;
  2. 可通过与Ca2+结合调节精液中Ca2+浓度而有助于防止前列腺中形成结石;
  3. 柠檬酸有维持透明质酸酶的活性;
  4. 柠檬酸与K+和Na+结合,可维持精液内渗透压的平衡;
  5. 柠檬酸可起前列腺酸性磷酸酶激活剂的作用,从而影响精子活力。因此认为,柠檬酸可能在细胞外环境的稳定上起重要作用,因而能维持正常的生育能力和精子功能。

精浆中柠檬酸的测定方法有化学比色法、荧光分析法及气相色谱法等,以化学比色法较为常用。现简述如下。

精浆柠檬酸可与乙酸酐和吡啶反应(Furth-Hermann反应)生成有色产物,颜色深浅与柠檬酸含量成正比,故可根据标准曲线求得相应的精浆柠檬酸含量。

具体操作步骤如下:①取精浆50μl加至950μl 500g/L三氯乙酸中,立即充分混匀,3000r/min离心15min后,取上层去蛋白精浆备用;②取试管2支,于测定管中加入去蛋白精浆0.1ml,空白管内加入250g/L三氯乙酸0.1ml,两管中各加入乙酸酐0.8ml,混匀,56℃水浴保温10min,然后各加入吡啶0.1ml混匀,56℃水浴保温50min,取出置冰浴或冷水浴5min。③以蒸馏水调零,用分光光度计于423nm下测定吸光度值,查标准曲线,结果乘以20(稀释倍数)即为精浆中柠檬酸含量。④标准曲线的制备:用250g/L三氯乙酸配制0.119、0.238、0.476、0.952、1.904、2.855mmol/L的柠檬酸标准系列,按②中方法取代精浆操作,每一浓度作三管平行测定吸光度值,取均值。以吸光度均值为纵坐标,对应的柠檬酸标准浓度为横坐标绘制标准曲线。

在患急性或慢性前列腺炎时,精浆柠檬酸含量显著降低,精浆柠檬酸含量的测定可作为了解前列腺功能的重要指标。另外,研究显示,血浆睾酮浓度与精浆柠檬酸含量呈正相关,柠檬酸的生成和分泌是在睾酮刺激下进行的,因此,精浆中柠檬酸含量可间接反映睾丸分泌的雄激素水平。

亦有研究报道用酶法检测精浆柠檬酸含量,原理为:精浆柠檬酸在特异性酶的作用下生成酮酸。酸性条件下酮酸与偶联剂的反应产物在330nm波长处有最大吸收峰,其吸光度大小与精浆柠檬酸含量呈正比。

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