白蛋白柱分离法分离X精子和Y精子

原理:X精子和Y精子在白蛋白溶液中泳动速度不等,其中Y精子泳动速度更快,穿透黏稠的白蛋白溶液的能力更强,故可在较高浓度的白蛋白液层中获得更多的Y精子。

试剂与器材:

  1. Tyrode液;
  2. 不同浓度的白蛋白溶液(由Tyrode液稀释人血清白蛋白粉剂而获得);
  3. 14ml离心管;
  4. 试管。

一、两层白蛋白柱法

  1. 新鲜的液化精液与Tyrode液按1∶1比例混匀,700g离心10min,沉淀用Tyrode液调成精子浓度为60×106/ml的悬液;
  2. 在数支消毒无菌的8mm×75mm试管中,自下而上缓慢加入20%和10%的白蛋白溶液各0.5ml 和1.0ml,形成两层白蛋白柱,将上步制备的精子悬液分成0.5ml一份,分别加入白蛋白柱上层,使试管中可见分界清晰的三层液体;
  3. 室温下孵育60min后,小心移去最上层的精子悬液层,再孵育30min,移去10%白蛋白层,剩下的20%白蛋白层700g离心15min,最后的精子沉淀用Tyrode液调精子浓度为20×106/ml。

二、三层白蛋白柱法

  1. 新鲜的液化精液与Tyrode液按1∶1比例混匀,300g离心10min,沉淀用Tyrode液调成精子浓度为30×106/ml的悬液;
  2. 将上述精子悬液分成0.5ml一份,分别加到试管中的1.0ml 7.5%白蛋白层上,室温孵育60min,7.5%白蛋白层被吸出,300g离心10min,沉淀用0.5ml Tyrode液悬浮;
  3. 在另一支试管中,自下而上缓慢加入20%和12.5%白蛋白溶液各0.5ml和1.0ml,形成白蛋白柱层,将上步的0.5ml精子悬液加到白蛋白柱层上;
  4. 室温下孵育1.5h后,吸出20%白蛋白层,用Tyrode液1∶1稀释后,300g离心10min,最后精子沉淀用Tyrodes液调精子浓度为20×106/ml。

结果与讨论:Ericsson等采用白蛋白柱分离法获得Y精子含量高达85%,Quinlivan等采用该法Y精子含量平均达74%,而Beernink等采用该法获得的精子行人工授精,男婴出生率为79%;Wang等采用该法获得的Y精子有统计学意义上的增加,但并非如上述结果那么明显。而Brandriff等则发现白蛋白法处理后Y精子未见变化,反而是X精子有轻微增加。

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