电泳法分离X精子和Y精子

原理:正常人精子膜表面含有的大量唾液酸使精子都带有负电荷,其中X和Y精子表面负电荷含量不等,这样在电场作用下可将X和Y精子分离。

试剂和器材:

  1. Hank液(含10mmol/L HEPES,pH 7.4);
  2. 电泳池缓冲液:10mmol/L HEPES+30mmol/L NaCl+0.25mol/L蔗糖+1.0mg/ml白蛋白,pH 为7.4,渗透压为350mOsm/kg;
  3. 电极缓冲液:100mmol/L HEPES+80mmol/L NaCl,pH为7.4,渗透压为295mOsm/kg,传导性为9700μS/cm;
  4. ACE710型FreeFlow电泳仪。

方法:

  1. 液化精液用Hank液2倍稀释,150g离心15min,上清液一半被弃去,用电泳池缓冲液来代替弃去的一半,混匀离心再重复1次,最后精子沉淀用电泳液混悬并调精子浓度为60~80×106/ml;
  2. 在标准温度22℃,电场强度80~120V/cm条件下,处理后的精子悬液以细流方式连续注入到电泳池的缓冲液中;电解液、电泳缓冲液和精子悬液垂直通过电场,精子因为带负电荷而向正极迁移,根据不同的电泳迁移率将精子分离开;
  3. 分离开的精子分段进入到一组35个有出口的管中,最后收集到独立的35个容器中,分离结果直接通过电视摄像系统观察,如果在监视器上观察到密度测定曲线上出现两个明显的峰,则说明分离了X 和Y精子。

结果与讨论:Engelmann等采用该法获得了近100%的X精子和80%的Y精子;Manger等采用该法也获得满意的分离结果。精子膜表面负电荷是电泳法分离X、Y精子的基础,表面电荷的任何改变都可导致分离可能性的减少,特别在Y精子的分离方面。电泳法分离不成功,有两种可能:①精子没有表达出电荷不同;②电荷差异很小,以致不能用电泳仪鉴别。

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