精液弹性蛋白酶的检测

精液弹性蛋白酶由活化的粒细胞分泌,已证实是一敏感和定量的生殖道炎症指标。已报道,弹性蛋白酶浓度与白细胞精子症显著相关。而且,生育男性比不育男性有较低的弹性蛋白酶浓度。由于精液白细胞的检测比较复杂,而且炎症过程中白细胞有可能受破坏不易被检测到,因此,精液弹性蛋白酶的检测就相对有优势,其不仅适合于大量标本的检测,而且操作简单、快速。精液弹性蛋白酶可以作为男性生殖道隐性炎症的可靠指标。

一、检测原理

常规ELISA法。包被于固相载体的抗弹性蛋白酶抗体可与精液中弹性蛋白酶相结合,结合的待测物再与特异性酶标记物(酶标抗弹性蛋白酶抗体或酶标抗α1蛋白酶抑制剂抗体)反应,最后通过底物显色,其吸光度大小与精液标本中弹性蛋白酶浓度相关。

二、操作步骤

具体操作依所用试剂盒不同有所不同,基本操作程序为:①将已包被的微孔板及所有检测试剂置于室温下平衡30min;②每孔加待测标本100μl,以及阳性标准品和阴性对照各100μl;③37℃温育30min或1h;④用PBS-T洗板4次,每次3min,拍干;⑤每孔加酶结合物2滴,充分混匀,用封膜覆盖,置37℃温育30min;⑥甩净孔内液体,加洗液,洗涤方法同上;⑦每孔加显色液A、B(底物溶液)各1滴,混匀后避光反应10min;⑧每孔加终止液1滴,终止反应;⑨以空白孔调零,450nm测吸光度值,根据阳性标准品的吸光度值求出精液样本中弹性蛋白酶含量。

三、正常参考值

正常生育男性精液弹性蛋白酶浓度:<250ng/ml。250~1000ng/ml为可疑生殖道感染。

四、临床意义

男性生殖道感染时,分叶核粒细胞参与吞噬病原体等抗炎反应,并分泌大量弹性蛋白酶至胞外。弹性蛋白酶与其他氧化物质(如活性氧、过氧化氢、氢氧根离子等)共同发挥局部抗炎效应,弹性蛋白酶与随后分泌的α1蛋白酶抑制剂结合,形成弹性蛋白酶-α1蛋白酶抑制剂复合物,该复合物浓度与弹性蛋白酶释放量高度相关,可作为分叶核粒细胞生殖道抗感染的活性检测指标。

有研究标明,精液弹性蛋白酶浓度与精液中白细胞呈良好相关性。精液白细胞浓度>1×106/ml时,精液弹性蛋白酶浓度常>1000ng/ml。但当精液白细胞浓度<1×106/ml时,亦有少数标本精液弹性蛋白酶浓度>1000ng/ml。

精液弹性蛋白酶可作为隐性生殖道感染的诊断及愈后检测指标,并可用于治疗的随访。

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