精浆尿酸的检测

尿酸(UA)为人体嘌呤分解代谢的最终产物,过去曾认为是一种没有生理意义的物质,现在研究发现,其能直接结合铁、铜离子,发挥预防性抗氧化功能,也能直接清除单线态氧及羟基自由基等物质。正常男性生殖系统中具有多种抗氧化物质,而UA为重要的抗氧化物质之一。精浆中的强抗氧化缓冲能力可以保护精子免受氧化损伤。研究显示,UA对精子活力有利。精浆UA水平亦与正常形态精子百分率呈显著正相关(P=0.025)。而且,正常生育男性的UA平均水平显著高于不育患者。因此,检测精浆UA水平对辅助诊断男性不育可能有重要意义。

目前用于检测精浆UA的方法很不统一,一般都要经过萃取后检测,操作非常烦琐和费时。最近,陆金春等利用检测血清UA的UA氧化酶法加以改良后建立了精浆UA检测。由于精浆成分复杂且含有丰富的蛋白质,有一定黏稠度,故精浆UA检测不象血清那么简单,需要先沉淀精浆蛋白后再测定。现将此法叙述如下。

一、检测原理

尿酸在尿酸酶催化下,氧化生成尿囊素和过氧化氢。过氧化氢与4-氨基安替比林(4-AAP)和3,5-二氯-2-羟苯磺酸(DHBS)在过氧化物酶的催化下,生成有色物质(醌亚胺化合物),其色泽与样本中尿酸浓度成正比。

二、所用试剂

酶混合试剂:尿酸酶160U/L,过氧化物酶1500U/L,4-AAP 0.4mmol/L,DHBS 2mmol/L,pH7.7磷酸盐缓冲液100mmol/L。称取的混合干粉试剂,在应用前用蒸馏水复溶,在4℃可稳定2周。同时配制300μmol/L的尿酸标准应用液,0.175mol/L ZnSO4溶液和0.15mol/L Ba(OH)2溶液。

三、操作步骤

基本操作步骤为:取液化后的精液标本0.1ml于测定试管中,加入1.5ml蒸馏水、0.4ml 0.15mol/L Ba(OH)2、0.4ml 0.175mol/L ZnSO4,每一步都充分混匀,静置5min后于3000r/min离心15min,取上清液1.2ml于另一试管中,同时设标准管,加入10μl尿酸标准液和1.2ml蒸馏水,测定管和标准管均加入300μl尿酸试剂,混匀,37℃水浴15min之后于3000r/min离心15min,取上清液,于520nm波长处比色。精浆尿酸浓度=(测定管吸光度/标准管吸光度)×60μmol/L。

四、正常参考值

正常生育男性精浆尿酸的正常参考值范围为:397.57~526.45μmol/L。

五、临床意义

精液UA含量与血液类似。尽管精浆中UA的来源还不清楚,但精浆中UA的抗氧化作用已被证实,而且精子参数正常的不育患者精浆UA水平降低。尿酸有酮式和烯醇式两种形式,烯醇式具有酸性,与钠离子形成尿酸钠盐,尿酸钠盐在弱碱性体液中以阴离子形式存在,与ROS作用后,生成稳定的尿酸自由基,从而起到抗氧化作用。而且,UA可显著增加SOD活性。因此,检测精浆UA水平对辅助诊断与抗氧化能力降低相关的男性不育有重要意义。

精浆UA测定中应引入质量控制体系。精浆UA十分稳定,不需加入蛋白酶抑制剂苯甲酰磺酰氟(PMSF)即可在精浆中稳定存在,故冷藏精浆标本可作为不同实验室之间的质控品。对每批标本的测试都应该带有高、低浓度的两种质控品。

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