精子膜完整性及运动能力的评价

精子膜生理功能状态检查方法问题

精子膜完整性和功能活性与精子获能、顶体反应、精子运动能力及与透明带和卵黄膜结合能力紧密相关。评价精子膜完整性的传统方法是台盼蓝或伊红Y或黑色素染色法。这些染色的结果可以帮助人们了解活精子所占的百分率。其原理是活精子膜作为染料穿透的屏障,只有在精子膜受损或死精子时才可以着色。尽管这些方法对评价男性生育能力的临床意义并不大,但对于一份标本中死精子所占的百分率可提供诊断依据,对临床医生的治疗方案的选择有较大的帮助。

Jeyendran等首先建立了一种简便、经济且客观的精子膜低渗肿胀试验方法。由于正常的精子膜置入低渗(150mosmol/L)溶液中,渗透压的作用使精子尾部发生肿胀,又由于低渗肿胀试验结果与伊红Y染色结果在评价死精子方面一致,所以说,可用伊红Y染色以鉴定精子膜的结构完整性,而用低渗肿胀试验来评估精子膜生理完整性。

精子尾部低渗肿胀试验方法

低渗肿胀液法

一、试剂及设备

  1. 双蒸水;
  2. 果糖液(150mOsm/L);
  3. 柠檬酸钠液(150mOsm/L);
  4. 相差显微镜。

二、方法

  1. 吸取0.1ml,完全液化的新鲜精液;
  2. 以BWW培养液调整精子浓度为2~10×106/ml;
  3. 加1.0ml低渗液;
  4. 混匀;
  5. 滴片;
  6. 37℃温育30min~1h;
  7. 盖片;
  8. 光学显微镜观察;
  9. 计数尾部发生肿胀和未发生肿胀精子的百分率;
  10. 正常参考值:精子总肿胀率为76.28%±6.87%。

水试验方法

  1. 新鲜精液;
  2. 37℃水浴箱中温育60min;
  3. 10μl完全液化的新鲜精液加40μl双蒸水;
  4. 充分混匀;
  5. 滴片;
  6. 37℃水浴箱中温育5~30min;
  7. 相差显微镜下观察;
  8. 计算200条精子中发生和未发生肿胀精子的百分率。

结果解释:大于或等于60%发生肿胀的精子为正常;59%~50%界于正常与异常之间;小于50%为异常。

低渗溶液的配制:果糖13.51g;柠檬酸钠7.35g;双蒸水1000ml。(渗透压:150mosm/kg,离子强度0.15)

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