人X染色质检查

女性的两条X染色体在胚胎初期一条保持代谢活性,与常染色体一起进行正常活动,另一条DNA复制较晚,呈异固缩状态,形成X染色质(又称X小体或Barr小体),即女性的性染色质,存在于间期细胞核中,可被特异的染料染色呈深色而显示出来,代表失活了的X染色体。

试剂与器材:口腔黏膜细胞,显微镜、香柏油、消毒压舌板、小烧杯、离心管、离心机、酒精灯、毛细吸管、恒温水浴箱、载玻片;生理盐水、甲醇、冰醋酸、5mol/L HCl、硫瑾染液。

实验内容与方法:

  1. 先让待检者用自来水漱口2次,然后用消毒压舌板刮取两颊上的黏膜细胞,第一次刮取物洗去不要,将第二次刮取物立即洗于生理盐水中,如材料少,可反复多刮几次;
  2. 将上述细胞悬液倒入离心管,1000r/min离心5min,吸去上清液;
  3. 加5ml左右5mol/L HCl,混匀后置室温或37℃水浴中消化12~15min,离心沉淀,吸去上清液;
  4. 加新鲜配制的固定液(甲醇∶冰醋酸=3∶1)3~4ml,混匀,固定20min,离心沉淀,吸去上清液;
  5. 加8ml左右生理盐水,混匀,离心沉淀,1000r/min,5min,吸去上清液;
  6. 加5~10ml固定液(视细胞多少而定)混匀,制成细胞悬液;
  7. 取准备好的冷湿玻片一张,用毛细管吸0.5ml左右的细胞悬液,滴2~3滴于玻片上,通过酒精灯火焰,待干;
  8. 用硫瑾工作液染色10~20min,镜检。

观察、计数:形态:标本经染色后,细胞核呈淡紫蓝色,X染色质呈深紫蓝色,它紧贴核膜内侧边缘,呈平凸形、馒头形、三角形、球形等状,为一直径约1~1.5μm、边界清楚的深染小体。

计数:选择核较大、核质颗粒少、染色均匀清晰、核膜完整无皱叠的细胞核作为可计数细胞。每份标本至少计数100个细胞。

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