染色细胞学检查方法

最常用的染色法有巴氏法(Papanicolaou stain)和MGG法(May-Grunwald-Giemsa stain)。另外苏木精-伊红染色(Hematoxylin-Eosin stain)也常用于细胞学染色。

巴氏染色的优点是能满意鉴别核的特性,能清楚显示细胞核膜、染色质分布,核仁清晰可见。并可显示细胞质嗜伊红或嗜碱情况,特别是对角化明显的表皮样细胞更能清晰显示。

MGG染色的优点是细胞质染色较佳,可以明确显示细胞外形、细胞间质和细胞质内含物,而细胞核的特性表现不如巴氏法。

HE染色的细胞学表现则不如前述两种方法。

Papanicolaou染色法

(1)将涂片依次放入90%、80%、70%、50%酒精及蒸馏水中各2分钟;

(2)用苏木精(Harris Hematoxylin)染10分钟,取出后用自来水冲洗两遍;

(3)在1%盐酸酒精过1~2下,取出后在自来水中冲洗,然后置稀碳酸锂液2分钟,此时涂片转成蓝色;

(4)将涂片置入50%、70%、80%及90%酒精中各2分钟;

(5)置入橘黄G6染液中两分钟,取出后分两次置入90%酒精中各2分钟;

(6)在EA36染液中染两分钟,取出后分两次置入90%酒精中各2分钟;

(7)分两次置入无水乙醇脱水10~15分钟。若非急需可多置一段时间;

(8)分2~3次置入二甲苯中各2分钟,取出后用树脂及盖玻片封固待用。

整个染色过程约需1小时左右。

巴氏染色法试剂的配制:

(1)苏木精系常用染料,其配制方法不做介绍,并有成品可买到。

(2)橘黄G6(Orange G6)以橘黄G60. 5克溶于5ml蒸馏水中,待完全溶解后加入无水乙醇100ml及磷钨酸0. 015克,用时过滤。

(3) EA36,又称亮绿,由三种染料配制而成。

淡绿(light green SF yellowish) 0. 1克加95%酒精至100ml;

俾士麦棕(bismark brown) 0. 5克加95%酒精至100ml;

黄色曙红(eosin yellowish) 0. 5克加95%酒精至100ml。

然后取上述淡绿45ml、俾士麦棕10ml和黄色曙红45ml混合,再加入磷钨酸0. 2克、碳酸锂饱和液一滴即可备用。

(4)稀碳酸锂液:100ml蒸馏水加碳酸锂饱和液一滴制成。

May-gruenwald-Giemsa染色法

(1)将干燥涂片置于May-Gruenwald工作液中15分钟;

(2)自来水冲洗15分钟;

(3)置Giemsa工作液中15分钟;

(4)自来水冲洗数分钟;

(5)空气干燥;

(6)置二甲苯中两次,每次10秒左右;

(7)置盖玻片用树脂封固。

May-Gruenwald-Giemsar染液配制方法:

(1) May-Gruenwald原液:10克依红-美蓝溶于100ml甲醇中;

(2) Giemsa原液:10克Giemsa原液粉加入66ml的甘油中,于37℃孵温3小时,偶尔搅拌,再加入66ml甲醇,置冰箱备用(可用6个月);

(3) May-Gruenwald工作液:在40ml May-Gruenwald原液中加入20ml甲醇,(每周制备一次备用);

(4) Giemsa工作液:5ml Giemsa原液加入45ml蒸馏水后备用(需每天配制)。

本章所述细胞学表现均以Papanicoloau染色为准。

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