细胞或组织内蛋白定位技术

免疫组织化学

又称免疫细胞化学,利用抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究。这种方法把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来,借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用,在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质(如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体以及受体等)。免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体。实验所用主要为组织标本和细胞标本两大类,前者包括石蜡切片(病理大片和组织芯片)和冰冻切片,后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。其中石蜡切片是制作组织标本最常用的方法。

蛋白质芯片

蛋白质芯片是近年来蛋白质组织学研究的一种新方法,它能一次平行分析成千上万个蛋白质样品,是其他蛋白质研究方法无法相比的。其制作原理类似于基因芯片,所不同的是,蛋白、多肽芯片所用的样品是提纯的蛋白、多肽。其检测的原理类似于抗原、抗体检测的ELISA法。如采用双抗夹心的形式,可通过机械点涂的方法,将多种不同的单克隆抗体点样固定在固相介质表面,如PVDF膜上,制备成抗体蛋白芯片。然后与制备的多种抗原样本杂交,芯片上的抗体捕获相应的抗原,由于抗原具有多价结合表位而结合标记抗体,根据杂交信号的有无、多少,从而进行定性、定量的分析。蛋白质芯片技术可用于研究蛋白质与蛋白质之间的相互作用,检测蛋白质一药物、蛋白质一脂质之间的相互作用,以及检测蛋白与小分子物质的作用。

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