放射自显影用于细胞功能研究

放射自显影术(autoradiography)实验应用广泛,其原理是研究材料中的放射性核素释放的射线可作用于感光乳胶,使其中的卤化银感光形成潜影,再经显影剂和定影剂处理,则在乳胶中留下清晰的图像。它可用于研究细胞的物质代谢、动态变化和细胞周期等,亦可用于药物作用机制的研究。

通常可先进行试验性曝光,以试出最佳曝光时间,也可借鉴同类工作。3H、14C和35S标记物通常曝光3~7天。目前国内外研究报告有两种方法能缩短曝光时间,一种是使用闪烁液加速涂敷原子核乳胶切片的曝光,可显著缩短放射自显影的时间(缩短至10小时),另一种是使用高比活度的3HTdR和-80℃低温冰箱。新近出现的磷屏成像是利用β射线或光子作用于磷屏中的BaF/Br/Eu2+或SrS/Ce;Sm2+晶格,使晶格分子氧化,形成稳定的高能状态。再用激光扫描到带有稳定的高能量晶格分子时使之还原,恢复到基态,同时多余的能量以光子形式释放,被光电倍增管接受。最后在计算机屏幕上产生一个定量的图像。其可用于多种核素的宏观自显影且可定量,灵敏度高,成像快,操作简便,不需胶片和显影定影等步骤,但分辨率较低,涉及激光和共聚焦光学系统较昂贵。

显影和定影时间取决于曝光时间和放射核素剂量

在一般的照相显影液中,18~20℃时显影3~5分钟;然后于1%醋酸溶液中放置1~3分钟,再放至定影液内0.5小时左右。将标本用细流量的自来水连续冲洗3~5分钟,再用三蒸水洗涤1次,晾干后用吉姆萨染液染色(也可用HE染色)。染色后晾干,用中性树胶封片。

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