理想的Graves病动物模型应具有以下特点:①血清T4升高和TSH下降;②具有生物活性的TSHR抗体;③甲状腺有相应的病理改变;④淋巴细胞性甲状腺炎;⑤甲亢表现;⑥Graves眼病;⑦胫前皮肤淋巴细胞浸润。目前最好的AT的动物模型是OS鸡、BB大鼠和某些种系的NOD小鼠。在这些模型中,除了可发生破坏性甲状腺炎外,鸡和大鼠中有甲状腺免疫球蛋白,小鼠中有甲状腺过氧化物酶(TPO)阳性。

目前最好的AT的动物模型是OS鸡、BB大鼠和某些种系的NOD小鼠。在这些模型中,除了可发生破坏性甲状腺炎外,鸡和大鼠中有甲状腺免疫球蛋白,小鼠中有甲状腺过氧化物酶(TPO)阳性。

受体多肽诱导Graves病动物模型

但未发现淋巴细胞浸润性甲状腺炎,而且抗体和激素水平的变化较大,稳定性及重复性较差。

用细菌产生重组TSH受体的融合蛋白的胞外部分(ECD)与麦芽糖结合蛋白(MBP)联结后(ECD-MBP),免疫BALB/c小鼠(H-2d)。实验小鼠血清中出现甲状腺刺激性抗体,甲状腺血管增生并伴有局灶性甲状腺炎。然而,其他具主要组织相容性复合物(MHC)遗传特性的C57(H2b)和CBA(H2k)小鼠却对此种融合蛋白无反应。另外,经过ECD-MBP免疫的NOD小鼠也出现TRAb和破坏性甲状腺炎。

用杆状病毒载体与真核细胞获得的TSH受体多肽诱导产生TBAB的活性要优于原核细胞重组TSH受体多肽,用这种多肽免疫4种不同种株的小鼠,均出现了TRAb。BALB/c小鼠还表现出血T4增高,甲状腺滤泡增生,但缺乏典型的炎症表现。利用杆状病毒群将TSH受体胞外部分的基因转入昆虫细胞,纯化后可以获得398个氨基酸的TSH受体ECD多肽。用此多肽免疫H2b、d、q、k、s各株小鼠发现,接受免疫的各株小鼠均出现特异的T细胞增殖和IgG升高。然而,这些IgG的出现都不伴有甲状腺功能改变,也未发现有甲状腺单核细胞浸润或甲亢的形态学变化。

采用含TSH受体cDNA的PBS和25%蔗糖制剂或预先用辛酸甘油酯(心脏毒素)处理实验动物发现,绝大多数动物出现促甲状腺素受体抗体(TRAb),并有TBII和TSAb的活性。虽然实验动物的血T4始终正常,但所有小鼠均发生了严重的甲状腺炎,其甲状腺内有大量B淋巴细胞浸润。NMRI杂合小鼠表现为TBAb阳性伴甲减,部分表现为TSAb伴甲亢。同时还伴有甲状腺炎和Graves眼病。

注入外源性TSH受体引起免疫细胞转导性Graves病

利用表达人类TSH受体和鼠MHCⅡ类抗原分子的成纤维细胞免疫AKR/N(H2k)小鼠。经过11~12周后,多数小鼠自发性死亡并伴有甲状腺肿。30%~40%的小鼠血清T4明显增高,并发现有TRAb。甲状腺组织学检查发现细胞增生、胶质小滴形成等,少数出现甲减。

用未分化T细胞和富含CD+的细胞群可将免疫状况转染给同源BALB/c或NOD小鼠。采用ECD-MBP(原核细胞重组TSH受体多肽片段)或核酸免疫活化T细胞,然后再传送此活化T细胞给同源小鼠,传送表达有TSH受体的活化T细胞后16天,BALB/c和NOD小鼠均出现类似于ECD-MBP免疫小鼠的甲状腺炎,并可维持14周。实验第4周,小鼠体内出现TRAb,并至少维持12周。但仅少数BALB/c小鼠在第8~12周时出现T4 升高。

异体组织移植诱发模型与人类Graves病有较大差异

异体移植甲状腺组织加外周血单核细胞(PB-MC)或特异T细胞克隆 给重症联合免疫缺陷病(SCID)小鼠异体甲状腺移植加PBMC注入,则小鼠体内的TSAb表达时间延长。但是小鼠并不表现血T4升高。若应用异体甲状腺和TSH受体特异的T细胞克隆,小鼠不仅产生TSAb,甲状腺滤泡也出现增生表现。部分研究提示,小鼠血清T4水平也可明显升高,且异体甲状腺组织的存活和功能均维持较长时间。将GD或毒性甲状腺瘤患者的甲状腺组织移植给无胸腺裸鼠,发现移植后的异体甲状腺组织能对TSH、γ-干扰素、GD患者血清及IgG产生反应。

为进一步提高SCID小鼠异体甲状腺移植的效果,有学者试用异体移植甲状腺组织加自体同源骨髓细胞(ABMC)来代替PBMC或特异T细胞。小鼠甲状腺过氧化物酶抗体和甲状腺球蛋白抗体产生的高峰明显迟于单独移植甲状腺者,而且GD甲亢的表现更加明显,T4和TSAb的水平更高、持续时间更长,移植的甲状腺组织摄碘率增高,甲状腺细胞显示出增生表现。有人推测,骨髓基质细胞(BMSC)可能对自身反应性分泌TSAb的B淋巴细胞的活化及维持有直接或间接的作用。

TSH受体抗体诱发的Graves眼病模型缺少细胞免疫证据

针对TSH受体的抗体可诱发Graves眼病,表现为眼肌纤维断裂、脂肪组织堆积和免疫细胞浸润等。外源注入TSH受体活化T细胞建立的BALB/c小鼠模型表现有类似于GD的眼部组织学变化,如眼部肌组织结构紊乱、脂肪组织堆积以及免疫细胞浸润等。

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